Bevacizumab
2019-03-14 
MCE小分子
Bevacizumab 是一种人源化的单克隆抗体，高亲和力且特异性地与所有 VEGF-A 结合。
MCE 的所有产品仅用作科学研究，我们不为任何个人用途提供产品和服务
Bevacizumab的生物活性
体外
人源化单克隆抗体Bevacizumab特异性结合所有VEGF-A同种型，具有高亲和力，并抑制其与VEGFR-1和VEGFR-2的相互作用。 实验分析表明，通过ELISA分析贝伐单抗对结合VEGF的EC50为0.18μg/ mL。 结合动力学测定显示类似的结果，贝伐单抗抑制VEGF诱导的HUVEC增殖，IC50值为0.047±0.0081μg/ mL 。
体内
结果表明，与对照组相比，FD006，Bevacizumab和地塞米松的结膜下给药均能显着抑制NaOH烧灼大鼠的CoNV [p] 。 NVP-LDE225和紫杉醇的组合产生持久的抗肿瘤活性，在实验结束时肿瘤大小为1.64cm3，而贝伐单抗加紫杉醇处理的小鼠在第84天达到最大允许的肿瘤大小
实验参考方法
Bevacizumab激酶测定
使用Octet RED上的Bio-Layer Inter-Ferometry测量贝伐单抗或FD006与VEGF的结合动力学。 该测定在30℃下在PBS缓冲液中进行。 在使用前将传感器尖端在缓冲液中预湿15分钟，并且每孔200μL稀释样品（VEGF）或缓冲液填充微孔板，并以1000rpm搅拌。 将抗人IgG生物传感器用Bevacizumab或FD006（10μg/ mL）预饱和，并在缓冲液中洗涤120秒，然后以10μg/ mL，3μg/ mL和1μg/ mL的浓度转移至VEGF。 。 分别测量VEGF结合和解离速率5分钟和10分钟。 使用Octet分析软件从非线性全局拟合计算动力学参数（Kon和Koff）和亲和力（KD）。 进行多次独立测量。
MCE尚未独立确认这些方法的准确性。 它们仅供参考。
Bevacizumab细胞分析
将人脐静脉内皮细胞（HUVEC）（1×104细胞/100μL/孔）接种于96孔板中，37℃培养14小时，内皮细胞培养基补充5％热灭活FCS，100U / mL 青霉素，100 U / mL链霉素和内皮细胞生长补充剂。 在低血清饥饿过夜后，用不同浓度的FD006或贝伐单抗处理细胞，其与10ng / mL VEGF预孵育30分钟，并在37,5％CO 2下孵育72小时。 然后，向每个孔中加入10μLCCK8并再孵育4小时。 通过分光光度计在450nm处测量吸光度以确定细胞活力。
MCE尚未独立确认这些方法的准确性。 它们仅供参考。
Animal Administration
大鼠
造模后，将90只大鼠随机分为5组（每组18只大鼠），接受结膜下注射，每只大鼠0.05mL（1）0.9％NaCl，（2）溶剂，（3）0.1％地塞米松（地塞米松磷酸钠） ），（4）25 mg / mL贝伐单抗和（5）25 mg / mL FD006在造模后第1天的上颞结膜。 所有化学灼伤和治疗均由一名研究人员进行。 操作者对每个角膜来源的治疗组不知情。 在术后第3,7,14,21和28天，在用过量10％水合氯醛处死大鼠后，收获眼睛用于进一步研究。
小鼠
将5周龄Balb / cAnNCrlBR无胸腺（nu + / nu +）小鼠注射到第四乳腺脂肪垫中，将MDA-MB-468细胞（每只小鼠107个细胞）重悬于200μL基质胶中。 肿瘤细胞注射后7天，随机分配荷瘤小鼠（每组n = 10）以接受以下剂量：每天口服NVP-LDE225 20mg / kg，持续4周; 贝伐单抗5mg / kg静脉内（i.v.），每周两次，持续4周，或这些药物的组合与紫杉醇静脉注射。 每周一次10毫克/千克，持续4周。 用游标卡尺评估肿瘤直径，并测量肿瘤体积（cm 3）。
MCE尚未独立确认这些方法的准确性。 它们仅供参考。
MCE 的所有产品仅用作科学研究，我们不为任何个人用途提供产品和服务
Bevacizumab的生物活性
体外
人源化单克隆抗体Bevacizumab特异性结合所有VEGF-A同种型，具有高亲和力，并抑制其与VEGFR-1和VEGFR-2的相互作用。 实验分析表明，通过ELISA分析贝伐单抗对结合VEGF的EC50为0.18μg/ mL。 结合动力学测定显示类似的结果，贝伐单抗抑制VEGF诱导的HUVEC增殖，IC50值为0.047±0.0081μg/ mL 。
体内
结果表明，与对照组相比，FD006，Bevacizumab和地塞米松的结膜下给药均能显着抑制NaOH烧灼大鼠的CoNV [p] 。 NVP-LDE225和紫杉醇的组合产生持久的抗肿瘤活性，在实验结束时肿瘤大小为1.64cm3，而贝伐单抗加紫杉醇处理的小鼠在第84天达到最大允许的肿瘤大小
实验参考方法
Bevacizumab激酶测定
使用Octet RED上的Bio-Layer Inter-Ferometry测量贝伐单抗或FD006与VEGF的结合动力学。 该测定在30℃下在PBS缓冲液中进行。 在使用前将传感器尖端在缓冲液中预湿15分钟，并且每孔200μL稀释样品（VEGF）或缓冲液填充微孔板，并以1000rpm搅拌。 将抗人IgG生物传感器用Bevacizumab或FD006（10μg/ mL）预饱和，并在缓冲液中洗涤120秒，然后以10μg/ mL，3μg/ mL和1μg/ mL的浓度转移至VEGF。 。 分别测量VEGF结合和解离速率5分钟和10分钟。 使用Octet分析软件从非线性全局拟合计算动力学参数（Kon和Koff）和亲和力（KD）。 进行多次独立测量。
MCE尚未独立确认这些方法的准确性。 它们仅供参考。
Bevacizumab细胞分析
将人脐静脉内皮细胞（HUVEC）（1×104细胞/100μL/孔）接种于96孔板中，37℃培养14小时，内皮细胞培养基补充5％热灭活FCS，100U / mL 青霉素，100 U / mL链霉素和内皮细胞生长补充剂。 在低血清饥饿过夜后，用不同浓度的FD006或贝伐单抗处理细胞，其与10ng / mL VEGF预孵育30分钟，并在37,5％CO 2下孵育72小时。 然后，向每个孔中加入10μLCCK8并再孵育4小时。 通过分光光度计在450nm处测量吸光度以确定细胞活力。
MCE尚未独立确认这些方法的准确性。 它们仅供参考。
Animal Administration
大鼠
造模后，将90只大鼠随机分为5组（每组18只大鼠），接受结膜下注射，每只大鼠0.05mL（1）0.9％NaCl，（2）溶剂，（3）0.1％地塞米松（地塞米松磷酸钠） ），（4）25 mg / mL贝伐单抗和（5）25 mg / mL FD006在造模后第1天的上颞结膜。 所有化学灼伤和治疗均由一名研究人员进行。 操作者对每个角膜来源的治疗组不知情。 在术后第3,7,14,21和28天，在用过量10％水合氯醛处死大鼠后，收获眼睛用于进一步研究。
小鼠
将5周龄Balb / cAnNCrlBR无胸腺（nu + / nu +）小鼠注射到第四乳腺脂肪垫中，将MDA-MB-468细胞（每只小鼠107个细胞）重悬于200μL基质胶中。 肿瘤细胞注射后7天，随机分配荷瘤小鼠（每组n = 10）以接受以下剂量：每天口服NVP-LDE225 20mg / kg，持续4周; 贝伐单抗5mg / kg静脉内（i.v.），每周两次，持续4周，或这些药物的组合与紫杉醇静脉注射。 每周一次10毫克/千克，持续4周。 用游标卡尺评估肿瘤直径，并测量肿瘤体积（cm 3）。
MCE尚未独立确认这些方法的准确性。 它们仅供参考。
