Anti-HA 磁珠Anti-HA Magnetic Beads

　　MCE Anti-HA 磁珠用于细菌和哺乳动物细胞裂解物以及体外表达系统中 HA 标记蛋白的免疫沉淀（IP）实验。

 

　　MCE Anti-HA Magnetic Beads (Anti-HA 磁珠)由高质量的鼠源 IgG3a 单克隆抗体与氨基磁珠共价偶联制备，具有较高的 HA 标签融合蛋白加载容量 (> 0.5 mg 蛋白/mL)，可用于细菌和哺乳动物细胞裂解物以及体外表达系统中 HA 标签 (YPYDVPDYA) 蛋白的免疫沉淀。

 

　　产品优点如下：

 

　　1. 免疫沉淀时只需少量磁珠。

 

　　2. 方便省时。

 

　　3. 非特异性结合率低。

 

　　4. 样品损失少。

 

　　5. 蛋白质结合能力高达 0.6 mg/mL。

 

　　6. 稳定。

 

　　操作流程

 

　　1. 抗原样品制备

 

　　根据不同的样品选择合适的处理方法

 

　　2. 磁珠预处理

 

　　混悬Anti-HA 磁珠 Anti-HA Magnetic Beads，取 10 μL 磁珠，置于 1.5 mL EP 管中，加入 500 μL 洗涤缓冲液，充分混悬，置于磁力架上磁性分离，弃上清。重复以上洗涤步骤 2 次。

 

　　3. 样品的结合

 

　　在上述分离得到的磁珠中加入 500 μL 细胞裂解液，充分混悬，置于翻转混合仪孵育，室温孵育 2 小时或者 4 °C 条件下孵育过夜。置于磁力架上磁性分离，弃上清。

 

　　注意: 结合过程中，磁珠可能会出现聚团或呈片状，属于正常现象，不会 影响实验结果。 相关产品推荐：蛋白AG磁珠Protein AG磁珠

 

　　4. 洗涤

 

　　在上述分离得到的磁珠中加入 500 μL 洗涤缓冲液，充分混悬磁珠，磁性分离，弃上清。重复以上洗涤步骤 3 次。

 

　　5. 洗脱

 

　　本说明书提供三种 HA 标签蛋白洗脱方案，操作者可以根据后期检测的需 要选择不同的洗脱方案。

 

　　1) 变性洗脱法：此方法洗脱的样品适用于 SDS-PAGE 检测。 步骤：分离磁珠，弃上清，向磁珠中加入 50 μL 的 1× SDS-PAGE Loading Buffer 混合均匀 95°C 加热 5 分钟。分离磁珠，收集上清至新的 EP 管，进行 SDS-PAGE 检测。

 

　　2) 酸性洗脱法：此方法洗脱的样品保持原有生物活性，可用于后期功能分析。 步骤：分离磁珠，弃上清，向磁珠中加入 50 μL 的洗脱缓冲液 A 混合均匀，室温孵育 10 分钟。分离磁珠，收集上清至新的 EP 管，按每 50 μL 洗脱液加入 25 μL 中和缓冲液的比例加入中和缓冲液，将洗脱产物 pH 调节至中 性，样品用于后期功能分析。

 

　　3) 竞争性洗脱法：此方法洗脱的样品保持原有生物活性，可用于后期功能分析。 步骤：分离磁珠，弃上清，向磁珠中加入 3-5 倍磁珠体积的洗脱缓冲液 B 混合均匀，室温孵育 1 小时或者 4°C 条件下孵育 1-2 小时。分离磁珠，收集上清至新的 EP 管，即为目的蛋白，样品用于后期功能分析。