β-Amyloid (25-35)

　　β-Amyloid(25-35)(Amyloid beta-peptide(25-35))是阿尔茨海默氏淀粉样蛋白β肽的Aβ(25-35)片段，在培养细胞中显示出神经毒性活性。

 

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　　β-Amyloid (25-35)的生物活性

 

　　体外研究

 

　　Aβ(25-35)肽的氨基酸序列为NH2-Gly-Ser-Asn-Lys-Gly-Ala-Ile-Ile-Gly-Leu-Met-COOH，其中第一个Gly代表25号氨基酸，最后一个Met代表35号氨基酸。淀粉样蛋白β肽(25-35)也首次在凝胶状态下进行了研究。采用振动吸收法和ECD法进行了对比研究。利用振动吸收和VCD光谱研究了Aβ(25-35)肽膜的构象偏好。淀粉样蛋白β肽(25-35)诱导离体脑线粒体的凋亡效应和蛋氨酸-35的氧化还原状态，在诱导程序性细胞死亡途径和毒性事件中起关键作用。

 

　　β-淀粉样蛋白聚集指南(以下是我们推荐的方案。本协议仅提供了一个指南，应根据您的具体需求进行修改)。

 

　　0.用冷六氟-2-丙醇(HFIP)溶解固体Aβ肽。肽在室温下孵育至少0小时，以建立单体化和结构随机化。

 

　　2.通过蒸发除去HFIP，得到的肽作为膜在-20或-80℃保存。

 

　　3.将得到的膜在5 mM的无水DMSO中溶解，然后涡流稀释到适当的浓度和缓冲液(无血清和无酚红培养基)。

 

　　4.4-8℃陈化48h。样品04000g,4-8℃离心00min;可溶性低聚物在上清液中。将上清液稀释00-200倍进行实验。

 

　　方法因下游应用程序而异。

 

　　体内研究

 

　　β-Amyloid(25-35)可用于动物建模，构建阿尔茨海默病模型。

 

　　实验参考方法

 

　　细胞试验

 

　　细胞活力通过改进的MTS测定法确定，该测定法基于线粒体脱氢酶将四氮唑盐转化为分光光度法在490 nm可测量的甲醛产物。将PC02细胞以00 000个细胞/孔的密度镀于96孔板中，在完全培养基中保持06小时。然后用还原、氧化和去甲亮氨酸取代的蛋氨酸-35(00μM)作为000%细胞死亡的阳性对照，在不存在(对照)和存在40μM Aβ(30-35)和Aβ(25-35)的条件下培养细胞。肽孵育48 h后，每孔加入20μL MTS试剂(2.0 mg/mL)。然后将细胞在37°C的5%CO2培养箱中培养30-45分钟。加入25μL 00%的SDS停止反应。用微孔板读取器在490 nm处读取。每个数据点是使用三孔分析获得的。

 

　　MCE尚未独立证实这些方法的准确性。仅供参考。

 

　　动物实验

 

　　老鼠

 

　　选用雄性Sprague-Dawley大鼠54只(2月龄，300-350 g)。淀粉样蛋白β肽(25-35)以0mg/mL的浓度溶解在无菌蒸馏水中作为贮存液。以0μL/min的速率向双侧脑侧脑室注入5μL/侧的无菌蒸馏水(对照)，聚集aβ25-35(2μL/μL);针头放置5分钟，然后取出针头，将大鼠放在温暖的垫子上，直到唤醒它们。为确定a-β25-35处理大鼠的神经保护作用，将a-β25-35处理大鼠分别给予不同剂量的CDS和多奈哌齐治疗，每天0次，连续23天(包括行为测试持续时间)。采用Morris水迷宫和步进被动回避任务，研究CDS对aβ25-35诱导的记忆障碍的影响。将所有大鼠随机分为6组:(a)载体0(aβ25-35)+载体2(cd和多奈哌齐)，(b)aβ25-35+载体2，(c)aβ25-35+CDS(030 mg/kg)，(d)aβ25-35+CDS(260 mg/kg)，(e)aβ25-35+CDS(520 mg/kg)，(f)aβ25-35+多奈哌齐(0.5 mg/kg)。大鼠脑室微输注Aβ25-35(00μg/侧)或其载药后第0天，分别给予CDS或多奈哌齐或载药2，每天0次，连续04天，Morris水迷宫开始前进行被动回避任务。