mTOR 通路是如何调控自噬的

　　mTOR 是细胞生长和代谢的主要调节分子，可促进合成代谢过程，如核糖体的生物发生 （Ribosome biogenesis） 以及蛋白质、核苷酸、脂肪酸和脂质的合成，并抑制分解代谢过程，如自噬。mTOR 信号的失调与许多人类疾病有关，包括糖尿病、神经退行性疾病和癌症。

 

 

　　图 1. mTOR 信号通路及对疾病的影响

 

　　mTOR 是一种丝氨酸/苏氨酸激酶，属于 PI3K 相关激酶 （PIKK） 家族的成员，可与几种蛋白质相互作用形成两个不同的复合物，分别称为 mTOR 复合物 1 （mTORC1） 和 2 （mTORC2）。mTORC1 包含 mTOR、Raptor、PRAS40、mLST8 和 DEPTOR，对雷帕霉素 （Rapamycin） 敏感；mTORC2 包含 mTOR、Rictor、SIN1、Protor-1、mLST8 和 DEPTOR，对雷帕霉素急性治疗不敏感。

 

　　mTOR 通过与 mTORC1 或 mTORC2 的关键组分如 Raptor、Rictor、LST8 和 SIN1 作用，催化多个靶标的磷酸化，如 S6K1、4E-BP1、Akt、PKC、 IGF-IR 和 ULK1，从而调节蛋白合成、营养代谢、生长因子信号传导、细胞生长和迁移以及调节自噬等。

　　mTORC1 受多种刺激 （例如生长因子、营养物质、能量和应激信号） 以及基本信号传导途径 （例如 PI3K、MAPK 和 AMPK） 激活。

 

　　1、生长因子和激素 （例如胰岛素） 通过 I 类 PI3K 及其下游效应子 AKT 的激活来调节 mTORC1 信号传导，从而逆转 TSC1/TSC2 复合物和 PRAS40 对 mTORC1 信号传导的抑制作用；

 

　　2、营养物质如氨基酸通过促进 RAS 相关 GTP 结合蛋白 （RAG） 异二聚体向活性构象的转化来刺激 mTORC1；

 

　　3、细胞能量状态如低 ATP 水平下，通过 AMPK 磷酸化 TSC2，mTORC1 活性受到抑制。除 PI3K 和 AMPK 途径外，RAS/MAPK 信号也触发了 mTORC1 信号的激活。此外，Hippo 途径 （Hippo 途径与靶向策略）和 Wnt 途径 （Wnt 信号通路很复杂？） 也参与了对 mTORC1 和 mTORC2 的调控。

　　图 2. mTOR 上游：经典和非经典输入

 

　　mTORC1 活化后，通过磷酸化下游效应因子 S6K 和 4E-BP 促进合成代谢过程，例如蛋白质、脂质和核苷酸合成，同时，通过 ULK1 抑制分解代谢程序，从而导致自噬抑制。与 mTORC1 相比，对 mTORC2 的了解较少。如 mTORC2 可防止 AKT 泛素化和降解。mTORC2 还可激活 SREBP1c 促进成脂基因表达，以及刺激胰岛素样生长因子 2 （IGF2） 的产生。

　　自噬是一种溶酶体降解系统，涉及从头自噬形成。而自噬体的形成是由一系列称为 Atg 或“自噬相关”蛋白的蛋白质的协同作用驱动的。成熟的自噬体与溶酶体融合后，会被酸化，形成自溶酶体。溶酶体与自噬体的融合降解捕获的蛋白质，脂质，碳水化合物，核酸和细胞器 （Hello~自噬）。

 

　　大量研究表明 mTORC1 是自噬的关键调节剂，调节自噬过程中不同步骤 （如成核，自噬体延伸，自噬体成熟和终止） 。因此，mTORC1 是调控自噬的极具潜力的靶标。

 

　　

　　图 3. mTORC1 对自噬各个步骤的调控[9]

　　1、研究表明，mTORC1 通过磷酸化使形成的自噬调节复合物 （由 ULK1 和其互作蛋白 Atg13、FIP200、Atg101 等形成） 失活，从而影响自噬小体的生物发生。在营养丰富的条件下，mTORC1 通过介导 ULK1 （Ser637 和 Ser757） 和 Atg13 （Ser258） 特定位点磷酸化，抑制 ULK1 复合物的自噬促进激酶 （Autophagy-promoting kinase） 活性。在饥饿和细胞应激期间，mTORC1 活性被抑制，于是与 ULK1 分离。因此，ULK1 和 Atg13 的特定位点的磷酸化被解除。同时，ULK1 复合物通过 Thr180 处自磷酸化而变得活跃，并磷酸化 Atg13、FIP200、Atg101 和其他 Atg 蛋白。活跃的 ULK1 复合物随后转移到内质网的隔离膜上，自噬启动。

 

 

　　图 4. mTORC1 对 ULK1 复合物的调控作用[9]

 

　　2. 另外，AMPK 也与自噬有关。在葡萄糖充足的情况下，活性 mTORC1 通过磷酸化 ULK1 特定位点 （Ser 757） 并破坏 ULK1 与 AMPK 之间的相互作用来阻止 ULK1 活化，抑制自噬启动。在葡萄糖不足的情况下，AMPK 被激活，mTORC1 的磷酸化而被 AMPK 抑制，随后 ULK1 可以与 AMPK 相互作用并被 AMPK 磷酸化，活化的 ULK1 启动自噬。

 

　　3、自噬的成核步骤受到 PI3KC3 复合体 I 中 Atg14、AMBRA1 和 NRBF2 的磷酸化抑制。因此，mTORC1 可以通过磷酸化其成分 Atg14，AMBRA1 和 NRBF2 直接调节 PI3KC3-CI 的活性。

 

　　4、研究表明，mTORC1 通过分别靶向 WIPI2 和 p300 乙酰转移酶参与调节自噬体形成的延伸步骤，以及 LC3 与自噬体膜的结合。如通过抑制 p300 分子内自抑制，可促进 LC3 的乙酰化，这阻碍了 LC3 的脂化。WIPI2 通过与 Atg16L 结合并将 Atg12-Atg5-Atg16L 复合物结合到吞噬细胞上来促进磷脂酰乙醇胺对 LC3 的脂化作用。

 

　　5、mTORC1 还可以通过调节溶酶体生物发生所需基因的转录来间接抑制自噬。如 TFEB 是溶酶体生物发生和自噬基因的主要转录调节因子。TFEB 可上调与自噬体形成、自噬体与溶酶体的融合相关，以及溶酶体生物发生所需的一系列基因。此外，TFEB 的过表达可增加 UVRAG、WIPI、MAPLC3B、SQSTM1、VPS11、VPS19 和 ATG9B 的表达，它们参与了自噬的各个步骤。此外，mTORC2 也可通过激活 mTORC1 间接抑制自噬。

 

　　由于自噬与运动、代谢适应和衰老等生理过程，以及神经退行性疾病、传染病、心血管疾病，癌症等疾病过程有关，但自噬诱导是利是弊，取决于疾病的类型或阶段。例如，当营养有限时，自噬可以通过向肿瘤细胞提供营养来促进肿瘤发生和发展。因此，自噬的抑制可能使癌细胞对代谢应激条件敏感，从而导致细胞死亡。另外，mTORC1 作为自噬的主要调节剂，参与自噬过程，是极具有潜力靶标，实际上，mTORC1 的失调已经牵涉到与自噬缺陷相关的疾病中，并且已经有 mTOR 抑制剂在临床试验中或获批用于治疗这些疾病。

 

　　总之，mTOR 促进合成代谢并抑制自噬诱导，而用 mTOR 抑制剂调节自噬为多种疾病提供了新的治疗策略。

 

　　具有诱导自噬作用的 mTOR 抑制剂

 

　　Rapamycin雷帕霉素

 

　　有效且特异性的 mTOR 抑制剂，作用于 HEK293 细胞，抑制 mTOR，IC50 为 0.1 nM；与 FKBP12 结合且抑制 mTORC1；还是一种自噬 （autophagy） 激活剂，免疫抑制剂。

 

　　CCl-779

 

　　mTOR 抑制剂，IC50 值为 1.76 μM；能激活自噬 （autophagy），在动物模型中防止心脏功能恶化。

 

　　WYE-354

 

　　ATP 竞争性的 mTOR 抑制剂，IC50 为 5 nM；能抑制 mTORC1 和 mTORC2；在体外能诱导自噬 （autophagy） 激活。

 

　　Metformin二甲双胍

 

　　抑制肝脏中的线粒体呼吸链，导致 AMPK 活化，增强胰岛素敏感性，可用于 2 型糖尿病的研究；可以透过血脑屏障，诱导自噬 （autophagy）。