蛋白AG磁珠Protein AG磁珠

　　蛋白 A/G 磁珠为 IP、Co-IP 和 ChIP 实验提供了一种快速便捷的方法。

 

　　蛋白 A/G 磁珠提供了一种利用亲和结合进行蛋白质磁分离的快速而方便的方法。MCE 蛋白质 A/G 磁珠通常用于从血清、细胞培养上清或腹水中分离抗体，以及从细胞或组织提取物中免疫沉淀和共免疫沉淀抗原。

 

　　产品优势

 

　　1. 免疫沉淀时只需少量磁珠。

 

　　2. 方便省时。

 

　　3. 非特异性结合率低。

 

　　4. 样品损失少。

 

　　5. 蛋白质结合能力高达 0.7 mg/mL。

 

　　6. 稳定。

 

　　储存条件 & 期限 ：4°C，2 年；请勿离心、干燥或冷冻磁珠。

 

　　操作方法

 

　　1. 抗原样品制备

 

　　根据不同的样品选择合适的处理方法

 

　　2. 磁珠预处理

 

　　2.1 充分重悬磁珠.

 

　　2.2 取 25-50 μL 蛋白质 A/G 磁珠转移到 1.5 mL EP 管中（用量量可根据需要调整）。

 

　　2.3 加入 400 μL 结合/洗涤缓冲液，充分重悬磁珠。将 EP 管放入磁力架上，磁性分离。弃上清液。重复此步骤 2 次。

 

　　3. 抗体与磁珠结合

 

　　3.1 使用结合/洗涤缓冲液将抗体稀释至终浓度为 5-50 μg/mL 。

 

　　3.2 将稀释好的 400 μL 抗体加入步骤 2 处理好的磁珠中，充分混悬，置于翻转混合仪孵育 (室温，30 mins；4°C，2 hours)。

 

　　3.3 磁性分离，收集磁珠，上清液收集于新的 EP 管中，以备后续使用。

 

　　3.4 加入 400 μL 结合/洗涤缓冲液，充分混悬磁珠，磁性分离，弃上清；重复洗涤 4 次。

 

　　4. 抗原与抗体-磁珠复合物结合

 

　　4.1：加入 400 μL 抗原样品准备的抗原样品，充分混悬，置于翻转混合仪孵育 (室温，30 mins；4°C，2 hours) ，磁性分离，弃上清。

 

　　4.2 加入 400 μL 结合/洗涤缓冲液 充分重悬磁珠，磁性分离，弃上清；重复洗涤 4 次。

 

　　5. 抗原洗脱

 

　　本说明书提供以下两种抗原洗脱方案，操作者可根据后期检测的需要选择不同的抗原洗脱方法。

 

　　a. 变性洗脱法：此方法洗脱的样品适用于 SDS-PAGE 检测。 步骤：分离磁珠，弃上清，向磁珠中加入 25-50 μL 1×SDS-PAGE Loading Buffer 混合均匀，95°C 加热 5 mins。分离磁珠，收集上清，进行 SDS-PAGE检测。

 

　　b. 非变性洗脱法：此方法洗脱的样品保持原有的生物活性，可用于后期功能 分析。 步骤：分离磁珠，弃上清，向磁珠中加入 25-50 μL 洗脱缓冲液，室温孵育 10 mins；分离磁珠，收集上清至新的 EP 管，并立即滴入总体积 1/10 体积的中和缓冲液 (0.1 M NaOH)，将洗脱产物 pH 调节至中性，样品用于后期功 能分析。

 

　　注: 本步骤洗脱的抗原为抗原-抗体复合物，如操作者需要单独洗脱目标抗原，推荐使用交联剂，并按相关实验说明操作。