G418 选择性抗生素无菌溶液浓度

　　G418 选择性抗生素无菌溶液MCE G418 Selective Antibiotic, Sterile 是一种氨基糖苷类抗生素，主要通过影响 80S 核糖体的功能来干扰蛋白质的合成，对细菌、酵母、高等植物、哺乳动物细胞等均有毒性。

 

　　MCE G418 选择性抗生素，灭菌（G418 Selective Antibiotic, sterile）是已过滤除菌，可直接用于细胞培养的溶液。G418 选择性抗生素是一种氨基糖苷类抗生素，主要通过影响 80S 核糖体的功能来干扰蛋白质的合成，对细菌、酵母、高等植物、哺乳动物细胞等均有毒性。

 

　　储存条件 & 期限：-20°C; 2 年

 

　　G418 抗性基因（neo gene）位于转座子 Tn5 或 Tn601 (903)。在 Tn5 上成为氨基糖苷磷酸转移酶 3 (II) 或 APH (3) II，而在 Tn601 上则成为氨基糖苷激酶 3 (I) 或APH (3) I。这些基因来源于细菌，但也可以在真核细胞中表达。将任一抗性基因导入细胞可使细胞获得 G-418 抗性，从而用来筛选和维持培养携带抗性基因的原核或者真核细胞。

　　操作流程

 

　　1. G418 选择性抗生素溶液的工作浓度需要根据细胞类型、培养基、生长条件和细胞代谢率而适当调整。

 

　　2. 对于第一次使用的实验体系建议通过建立杀灭曲线（kill curve）来确定最佳筛选浓度  相关产品推荐：CCK-8试剂盒实验说明

 

　　1) 以 20-25% 的细胞密度铺板，铺足够量的孔以进行后续的梯度实验，37℃ 培养过夜。

 

　　2) 准备含梯度浓度 G418 选择性抗生素的新鲜培养基为筛选培养基，至少 5 个梯度。以哺乳动物为例，常用浓度为 50-1000 μg/mL，可设定 0、50、100、200、400、800、1000 μg/mL。

 

　　3) 细胞过夜培养后，使用上述配制的筛选培养基替换旧培养基，孵育细胞。每个浓度做 3 个平行对照。

 

　　4) 约 2-3 天更换新鲜的筛选培养基。

 

　　5) 每日监测细胞，观察活细胞比例。通常 7-10 天内能够杀死绝大多数细胞的最低浓度为筛选用的工作浓度。