线粒体膜电位检测试剂盒 JC-1

　　线粒体膜电位检测试剂盒 （JC-1） 是一种以 JC-1 为荧光探针，快速灵敏地检测组织、细胞或纯化的线粒体跨膜电势差的试剂盒，可以用于早期的细胞凋亡检测。

 

　　线粒体膜电位，ΔΨm是线粒体功能的一个重要参数，用作细胞健康的指标。使用JC-1ΔΨm将变化研究。与高ΔΨm健康细胞，JC-1复合物称为J-aggregates形式。在较低的细胞ΔΨm, JC-1仍然在单体的形式。当在490 nm激发时，JC-1单体发出绿色荧光，在~520 nm处最大。JC-1的聚集体在~590 nm处发出桔红色的荧光。

　　存储：保存在-20℃，避光，并稳定长达12个月。使用时避免重复的冻融循环。为了立即使用，组件可以储存在2-8℃。

 

　　线粒体膜电位检测试剂盒 JC-1的Protocol

 

　　1. 标记的细胞

 

　　a.在6孔板、12孔板、24孔板或96孔板中培养细胞，培养密度为5×105个/mL。按照您的正常程序孵育细胞。

 

　　b.确保JC-1和DMSO已平衡到室温，然后将一小瓶的内容物溶解在提供的DMSO的230°L中，配制200°°M的原液。

 

　　c.对于控制管，允许小瓶的CCCP达到室温，加1立方厘米的CCCP（50毫米）。37℃孵育5分钟。

 

　　d.每口井添加10井气L JC-1（200井气M），使最终浓度达到2井气M。37℃，5% CO2培养15-20分钟。如果附加标签之后，例如附录V，从步骤2.a开始。如果没有，继续步骤1.e。

 

　　e.孵育后，4℃，400×g离心3-4分钟，仔细吸出上盖。

 

　　f. PBS（1×）洗涤细胞2次：加入PBS 2 mL（1×）悬浮细胞，涡旋充分混合。4℃，400×g离心3-4分钟，仔细吸出上液。

 

　　g.加入500 mol / L PBS（1×）使细胞悬浮。用流式细胞仪、荧光显微镜或荧光酶标仪分析样品。

 

　　2. 附加标签与附件V

 

　　a.在步骤1之后。d、PBS（1×）洗涤细胞2次：加入PBS 2 mL（1×）悬浮细胞，涡旋充分混合。4℃，400×g离心3-4分钟，仔细吸出上液。

 

　　b.加入100个聚乙二醇L Annexin V结合缓冲液（10 mM HEPES, 140 mM NaCl, 2.5 mM CaCl2, pH 7.4），使jc -1染色的细胞悬浮。

 

　　c.加入5 mol / L Annexin V, 37℃，5% CO2孵育15分钟。

 

　　注：5 L适用于Annexin V，不同供应商使用剂量不同。

 

　　d.加入400个回环L Annexin V结合缓冲液（10 mM HEPES, 140 mM NaCl, 2.5 mM CaCl2, pH 7.4）使细胞悬浮。用流式细胞仪、荧光显微镜或荧光酶标仪分析样品。