Annexin V-FITC/PI 细胞凋亡检测试剂盒

　　MCE Annexin V-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒可方便、快捷的检测细胞凋亡。经Annexin V-FITC和PI联合染色后，正常细胞基本无荧光（Annexin V-/PI-），早期凋亡细胞呈绿色荧光（Annexin V+/PI-），晚期凋亡细胞及坏死细胞则呈绿色和红色荧光（Annexin V+/PI+）

 

　　MCE的Annexin V-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒提供了一种快速、方便的方法来检测细胞凋亡和坏死。在正常的活细胞中，磷脂酰丝氨酸（PS）位于细胞膜的胞质表面。当细胞启动凋亡时，PS从内层转移到外层的细胞膜上。Annexin V是一种分子量为35-36 kDa的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白，具有高亲和力与PS结合。用绿色荧光FITC标记的Annexin V能够通过结合外露在细胞膜外层的PS来识别凋亡细胞。碘化丙啶（PI）是一种不能穿过细胞膜的染料，可以将活细胞和早期凋亡细胞染成红色荧光，但会对晚期凋亡细胞和坏死细胞进行染色。染色后，活细胞显示少量或无荧光（Annexin V-/PI-），早期凋亡细胞显示绿色荧光（Annexin V+/PI-），晚期凋亡细胞和坏死细胞显示红色和绿色荧光（Annexin V+/PI+）。

 

　　Protocol:：

 

　　使用Annexin V-FITC和PI孵育细胞   相关产品推荐：线粒体膜电位检测试剂盒 JC-1

 

　　收集1-5×10个细胞。

 

　　对于悬浮细胞：以1000 g离心5分钟，然后丢弃上清液。加入1 mL预冷PBS悬浮细胞，以1000 g离心5分钟，然后丢弃上清液。

 

　　对于贴壁细胞：收集细胞培养基。用PBS洗涤细胞，并加入胰蛋白酶以解离细胞。加入培养基并轻轻悬浮细胞以制成单细胞悬浮液。以1000 g离心5分钟，然后丢弃上清液。加入1 mL预冷PBS悬浮细胞，以1000 g离心5分钟，然后丢弃上清液。

 

　　注意：建议使用不含EDTA的胰蛋白酶。

 

　　将细胞重新悬浮在195μL结合缓冲液中。

 

　　添加5μL Annexin V-FITC。

 

　　添加10μL PI染色剂。

 

　　在室温下暗处孵育细胞10-20分钟。

 

　　流式细胞仪检测

 

　　使用流式细胞仪分析Annexin-FITC结合（Ex=488 nm；Em=525 nm），使用FITC信号探测器（通常为FL1）和PI染色的菲藻素发射信号探测器（通常为FL2或FL3）。

 

　　注意：建议进行三个对照组：a：没有Annexin-FITC或PI的细胞；b：只有Annexin-FITC的细胞；c：只有PI的细胞。

 

　　荧光显微镜检测

 

　　通过荧光显微镜检测荧光：以1000 g离心5分钟，丢弃上清液，用50-100μL结合缓冲液重新悬浮细胞，然后通过荧光显微镜检测荧光。