链霉亲和素磁珠
2025-02-13 
MCE
MCE 链霉亲和素磁珠使用纳米表面生物技术将重组中性链霉亲和素共价偶联到超顺磁性磁珠微球表面，形成单分子固定层，可用于生物素化核酸、生物素化抗体或其他生物素化配体和靶分子的分离和检测。由于具有单层的链霉亲和素，其表面的绝大多数生物素结合位点在空间上不仅可以结合游离生物素，而且还可以结合生物素化的配体/靶标，使用简单有效。
链霉亲和素磁珠的操作流程
1. 固定化核酸
1) 将磁珠充分混悬，可置于混合器上涡旋振荡 20 秒，取 100 μL 磁珠到新的 1.5 mL EP 管中，置于磁力架，磁性分离，弃上清液。
注：用户可根据生物素化分子的使用量，参考磁珠的载量，计算需取用的磁珠体积，建议生物素化分子的加入量为磁珠载量的 1-2 倍，使磁珠结合饱和。
2) 加入1 mL Wash Buffer I，充分洗涤磁珠。磁珠洗涤过程：加入对应的buffer到EP 管中，盖上管盖，涡旋振荡磁珠15秒，磁性分离，弃上清。重复以上步骤1次。
3) 加入 500 μL 用 Wash Buffer I 稀释的生物素化核酸(使磁珠浓度为 2 mg/mL)，充分振荡混悬，置于旋转混合仪上孵育(室温, 30 分钟；4°C, 2 小时)。
4) 磁性分离，将上清液移至新的 EP 管中，以备后续使用。
5) 加入1 mL Wash Buffer I，充分洗涤磁珠。磁珠洗涤过程：加入对应的buffer到EP 管中，盖上管盖，涡旋振荡磁珠15秒，磁性分离，弃上清。重复以上步骤1次。
注：可通过测定反应前后核酸的浓度，计算结合到磁珠上的核酸量。 产品推荐：蛋白AG磁珠Protein AG磁珠
2. 固定化抗体/蛋白
1) 将磁珠充分混悬，可置于混合器上涡旋振荡 20 秒，取 100 μL 磁珠到新的 1.5 mL EP 管中，置于磁力架，磁性分离，弃上清液。
注：用户可根据生物素化分子的使用量，参考磁珠的载量，计算需取用的磁珠体积，建议生物素化分子的加入量为磁珠载量的 1-2 倍，使磁珠结合饱和。
2) 加入1 mL Wash Buffer II，充分洗涤磁珠。磁珠洗涤过程：加入对应的buffer到EP 管中，盖上管盖，涡旋振荡磁珠15秒，磁性分离，弃上清。重复以上步骤1次。
3) 加入 1 mL 用 Wash Buffer II 稀释的生物素化抗体/蛋白(使磁珠浓度为1 mg/mL)，充分振荡混悬，置于旋转混合仪上旋转孵育(室温, 60 分钟；4°C, 4 小时)。
4) 磁性分离，将上清液移至新的 EP 管中，以备后续使用。
5) 加入1 mL Wash Buffer II，充分洗涤磁珠。磁珠洗涤过程：加入对应的buffer到EP 管中，盖上管盖，涡旋振荡磁珠15秒，磁性分离，弃上清。重复以上步骤4次。
3. 洗脱
3.1 生物素标记核酸的洗脱
步骤：向磁珠中加入 50-100 μL Elution BufferⅠ，65°C 孵育 5 分钟或 90°C 孵育 2 分钟，置于磁力架，磁性分离，收集上清。
3.2 生物素标记抗体/蛋白的洗脱
a 变性洗脱法：此方法洗脱的样品适用于 SDS–PAGE 检测。 步骤：向磁珠中加入 50–100 μL 1 × SDS-PAGE Loading Buffer 混合均匀， 95°C 加热 5 分钟。置于磁力架，分离磁珠，收集上清，进行 SDS-PAGE 检测。
注：如果选择变性洗脱，那么洗脱液将包含链霉亲和素单体和聚体、生物素标记抗体或蛋白。
b 非变性洗脱法：此方法洗脱的样品保持原有的生物活性，可用于后期功能分析。 步骤：向磁珠中 50–100 μL Elution Buffer Ⅱ，室温孵育 5–10 分钟。置于磁力架，分离磁珠，收集上清至新的 EP 管，并立即滴入总体积 1/10 体积的中和缓冲液 (0.1 M NaOH)，将洗脱产物 pH 调节至中性，样品用于后期功能分析。
注：如果选择非变性洗脱，酸性条件下链霉亲和素可能会脱落，需注意孵育时间不要超过 10 分钟；酸性洗脱液能破坏大部分的抗体与抗原的相互作用，但为了更好的洗脱效果，可预先用 1 mL 0.1% Tween-20 的水溶液洗涤磁珠 1 次。
储存条件 & 期限：4°C，2 年
请勿离心、干燥或冷冻磁珠。
