Recilisib辐射防护剂可以激活细胞中AKT和PI3K的活性

　　Recilisib(ON 01210)是一种辐射防护剂，可以激活细胞中AKT和PI3K的活性。

 

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　　Recilisib的生物活性

 

　　体外研究

 

　　Recilisib(最高浓度为50μM)显示出细胞周期中的正态分布，且在50μM处S期的细胞数量略有减少。持续暴露于Recilisib(100μM)并不会导致细胞死亡。Recilisib处理并不抑制人骨髓细胞的集落形成潜能。Recilisib对所有三种剂量的IR下的人骨髓细胞提供了剂量依赖性的保护。Recilisib在HFL细胞中激活AKT和GSK3α/β的磷酸化。Recilisib增加了HFL-1细胞和小鼠骨髓细胞对辐射暴露反应中的PI3K活性。与放射线联合使用的Recilisib处理改变了MAPK信号传导途径。

 

　　MCE并未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。

 

　　体内研究

 

　　Recilisib(500 mg/kg)显著提高了小鼠原始骨髓髓样祖细胞恢复和分化的速度。配合辐射使用的Recilisib减少了小鼠的CFU数量，但是接受Recilisib治疗的小鼠始终保持形成分化菌落的能力。受Recilisib处理的小鼠拥有一个祖细胞群体，该群体永远不会被辐射暴露完全消耗掉。相关产品推荐：Ipatasertib是Akt抑制剂

 

　　实验参考方法

 

　　激酶测定

 

　　使用处于指数增长期的HFL-1或新鲜收获的小鼠骨髓细胞进行PI3激酶检测，这些细胞被用越来越高浓度的Recilisib Sodium处理2小时，然后用10 Gy IR辐射。然后将这些细胞返回孵育器中，孵育2至24小时，并在pH 7.5的HEPES裂解液中裂解。使用抗PI3 Kinas多克隆抗体在4°C下对PI-3K进行免疫沉淀2小时。蛋白质A/G PLUS-Agarose与免疫沉淀物在4°C下孵育8-16小时，并用两次pH 7.5的HEPES裂解液和一次激酶缓冲液（20 mM Tris pH 7.5，1mM EGTA，10mM MgCl2，2 mM DTT，0.01%NP-40）清洗得到的免疫沉淀物。L-α-磷脂酰肌醇（12.5 mM）和ATP（10µM）加入激酶缓冲液（每个样品60µL），并在30°C下孵育30分钟。通过添加100µL的1N HCl停止反应，并通过添加200µL CHCl3/CH3OH（1:1）提取。振荡提取的样品，离心，含有磷脂的有机相在27°C下干燥2小时。将干燥的样品用PI-4-P标准溶液（0.5 mL CHCl3，0.5 mL CH3OH，2.5µL HCl）重悬浮在10µL中，并点样于TLC板（VWR）。然后将点样的板子在CHCl3/CH3OH/NH4OH（40:40:15）中进行薄层色谱。然后烘干TLC板并进行自显影。相关产品推荐：Quercetin-槲皮素是PI3K抑制剂

 

　　细胞试验

 

　　在细胞毒性试验中，细胞（HPGM中每毫升1.0×10^5个细胞）被用Recilisib Sodium的各种浓度或者无辐射处理的载体进行处理2小时或24小时。然后洗涤细胞并将其接种到使用方格盘的甲基纤维素培养基中。通过使用Olympus IMT-2显微镜观察，确定14天后接种的菌落形成单位(CFUs)的总数。