Cyanine5 DBCO是一种低毒的叠氮化物反应探针

　　Cyanine5 DBCO(DBCO-Cy5)是一种低毒的叠氮化物反应探针(近红外荧光染料)，可通过无铜“点击反应”对叠氮化物标记的生物分子进行成像(Ex=635 nm,Em=650-700 nm)。Cyanine5 DBCO无明显的细胞和动物毒性，并且不影响靶细胞(叠氮化标记细胞)以外的其他细胞的生理功能。Cyanine5 DBCO可用于体内外细胞的标记和追踪。

 

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　　Cyanine5 DBCO的生物活性

 

　　体外研究

 

　　指南(以下是我们推荐的方案。此方案仅提供指南，应根据您的具体需要进行修改)。

 

　　细胞标记(例如A549细胞)：

 

　　1.将2 mL生长的种子细胞以3×104(因细胞而异)的密度接种到35毫米玻璃底培养皿中

 

　　2.加入Ac4ManNAz(50μM，终浓度)，孵育3天(在细胞表面产生叠氮基团)。

 

　　3.用DPBS(pH 7.4)洗涤细胞两次。

 

　　4.用Cyanine5 DBCO(20μM，终浓度)在37℃孵育细胞1 h℃。

 

　　5.DPBS(pH 7.4)冲洗细胞，甲醛-戊二醛联合固定液25℃固定15 min。

 

　　6.DPBS洗涤细胞两次(pH 7.4)并用DAPI染色细胞以标记细胞核。相关产品推荐：PKH 26红荧光染料

 

　　7.使用共聚焦激光扫描显微镜测量Cyanine5 DBCO荧光(Ex=635 nm，Em=650-700 nm)。

 

　　注意:

 

　　1)在用Ac4ManNAz处理后，Cyanine5 DBCO可以靶向细胞表面人工引入的叠氮基团超过3天。

 

　　2)程度Cyanine5 DBCO标记具有剂量依赖性。

 

　　体内研究

 

　　指南(以下是我们推荐的方案。此方案仅提供指南，应根据您的具体需求进行修改)。

 

　　体内细胞追踪：

 

　　1.将含有2 mL生长培养基的种子细胞以3×104(因细胞而异)的密度接种到35毫米玻璃底培养皿上。

 

　　2.加入Ac4ManNAz(50μM，终浓度)，孵育3天(在细胞表面产生叠氮基团)。

 

　　3.洗涤用DPBS(pH 7.4)对细胞进行两次处理。

 

　　4.对小鼠进行麻醉，然后将细胞(经过Ac4ManNAz处理后)注入肝左叶。

 

　　5.注入Cyanine5 DBCO(25μM，200μL)到尾静脉(3天将细胞注射到肝脏后)。

 

　　6.测量Cyanine5 DBCO荧光(Ex=635 nm，Em=650-700 nm)。体内近红外荧光(NIRF)图像是通过体内成像系统获得的。