DiOC18(3)的别名DiO是一种长链碳菁染料

　　DiO 是一种长链碳菁染料。碳菁染料广泛用作亲脂性示踪剂，用于标记细胞、细胞器、脂质体、病毒和脂蛋白。

 

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　　生物活性

 

　　体外研究

 

　　羰花青染料广泛用作 Di 来标记细胞、细胞器、脂质体、病毒和脂蛋白。长链羰花青包括 DiO (DiOC18 (3))、DiI (DiIC18 (3))、DiD (DiIC18 (5)) 和 DiR，以及二烷基氨基苯乙烯基染料 DiA (4-Di-16-ASP) 用于标记膜和其他疏水结构。DiIC16 (3) 具有比 DiI (C18) 更短的烷基取代基 (C16)。它们在脂质环境中具有极高的消光系数、环境依赖性荧光和短的激发态寿命。它们在室温下是油状物，在水中发出微弱荧光，但当掺入膜中或与亲脂性生物分子结合时，它们发出高荧光且相当耐光。这些光学特性使它们成为细胞质膜染色的理想选择。一旦应用于细胞，这些染料就会在质膜内横向扩散，导致整个细胞染色[1]。

 

　　DiO、DiI、DiD 和 DiR 呈现出不同的绿色、橙色、红色和红外荧光，从而促进活细胞的多色成像和流式细胞术分析。DiO 和 DiI 可分别与标准 FITC 和 TRITC 过滤器一起使用。其中 DiI 及其类似物是最常用的，因为它们通常表现出非常低的细胞毒性。此外，DiI 广泛用于测定 LDL 和 HDL 等脂蛋白。亲脂性氨基苯乙烯基染料 DiA 也常用于神经元示踪[2]。

 

　　一般方案

 

　　1. 制备 Di 染色液

 

　　a. 制备 DMF、DMSO 或乙醇储备溶液：储备溶液应在二甲基甲酰胺 (DMF)、二甲基亚砜 (DMSO 或乙醇 DMSO 中配制，浓度为 1-5 mM。作为 Di 的溶剂，DMF 优于乙醇。储备溶液应任何未使用的溶液需要等分并重新冷冻至少 -20℃。避免反复冷冻/解冻循环。溶液可储存 6 个月。

 

　　b. 准备工作溶液：将储备溶液稀释到合适的缓冲液如无血清培养基、HBSS 或 PBS 配制成 1 至 5 μM 的工作液。我们不建议将水溶液存放超过一天。

 

　　注意：工作液的最终浓度

 

　　2. 悬浮细胞

 

　　a. 1000g 4℃离心3-5分钟，弃上清，PBS洗2次，每次5分钟。细胞密度为1×106/mL。

 

　　b. 加入1 mL Di工作液，室温孵育5-30分钟。

 

　　C. 4℃，400g离心3-4分钟，弃上清。

 

　　d．用PBS洗涤2次，每次5分钟。

 

　　e．用无血清细胞培养基或PBS重悬细胞，荧光显微镜或流式细胞术观察。

 

　　3.贴壁细胞

 

　　a．在无菌盖玻片上培养贴壁细胞。

 

　　b.从培养基上取下盖玻片并吸出多余的培养基。

 

　　c.加入100 μL工作液，轻摇使之完全覆盖细胞，室温孵育5-30分钟。

 

　　d．用培养基洗两次，每次5分钟。通过荧光显微镜或流式细胞仪观察。

 

　　参考文献

 

　　[1]. Gan WB, et al. Multicolor "DiOlistic" labeling of the nervous system using lipophilic dye combinations. Neuron. 2000 Aug;27(2):219-25.

 

　　[2]. Warren GL, et al. Redistribution of cell membrane probes following contraction-induced injury of mouse soleus muscle.

 

　　[3]. Bhowmik BB, et al. Photophysical studies of 3,3' dioctadecyloxacarbocyanine dye in model biological membranes and different solvents. Chem Phys Lipids. 2001 Feb;109(2):175-83.

 

　　[4]. Bhowmik BB, et al. Photophysical studies of 3,3' dioctadecyloxacarbocyanine dye in model biological membranes and different solvents. Chem Phys Lipids. 2001 Feb;109(2):175-83.