鹅去氧胆酸Chenodeoxycholic Acid

　　鹅去氧胆酸 Chenodeoxycholic Acid 是一种疏水初级胆汁酸，能够活化核受体 FXR，该受体与胆固醇代谢有关。

 

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　　生物活性

 

　　体外研究

 

　　鹅去氧胆酸Cheonodeoxycholic acid (CDCA) 和 Deoxycholic acid (DCA) 均抑制 11 beta HSD2，IC50 值分别为 22 mM 和 38 mM，并引起皮质醇依赖性核转位并增加盐皮质激素受体 (MR) 的转录活性)[1]。Cheonodeoxycholic acid 能够通过激活膜 G 蛋白偶联受体 (TGR5) 依赖性通路诱导细胞周期蛋白 D1 蛋白和 mRNA 表达显著增加，从而刺激 Ishikawa 细胞生长[2]。在培养的人肝母细胞瘤细胞系 Hep G2[3]中，鹅去氧胆酸Chenodeoxycholic Acid (CDCA) 可将 LDL 受体 mRNA 水平提高约 4 倍，将 HMG-CoA 还原酶和 HMG-CoA 合酶的 mRNA 水平提高两倍。布美他尼、BaCl2 和囊性纤维化跨膜电导调节剂 (CFTR) 抑制剂 CFTRinh-172 可抑制鹅脱氧胆酸诱导的 Isc (≥67%)。Chenodeoxycholic Acid 刺激的 Isc 被腺苷酸环化酶抑制剂 MDL12330A 降低了 43%，而 Chenodeoxycholic Acid 增加了细胞内 cAMP 浓度[4]。Chenodeoxycholic Acid 处理可激活 C/EBPβ，如其在 HepG2 细胞中的磷酸化、核积累和表达增加所示。Cheonodeoxycholic acid 增强荧光素酶基因从含有-1.65-kb GSTA2 启动子的构建体转录，该启动子含有 C/EBP 反应元件 (pGL-1651)。Chenodeoxycholic Acid 处理可激活 AMP 活化蛋白激酶 (AMPK)，从而导致细胞外信号调节激酶 1/2 (ERK1/2) 激活，使用 AMPKα 显性失活突变体和化学抑制剂的实验结果证明了这一点[5]。

 

　　实验参考方法

 

　　激酶测定

 

　　简而言之，转染的HEK-293细胞在经过炭处理的杜尔贝克改良鹰培养基中孵育24小时后，用汉克缓冲液洗涤一次，并重悬于含有100 mM NaCl、1 mM MgCl2、1 mM EDTA、1 mM EGTA、250 mM蔗糖、20 mM Tris-HCl（pH 7.4）的缓冲液中。细胞通过液氮冷冻裂解。去氢酶活性在最终体积为20 μL的反应体系中测量，体系中包含适当浓度的胆汁酸、30 nCi的[3H]皮质醇和未标记的皮质醇（最终浓度为50 nM）。通过将细胞裂解液与反应混合物混合来启动反应。或者，从转染的HEK-293细胞中制备内质网微粒，并用含有不同浓度皮质醇和CDCA的反应混合物进行孵育。孵育持续20分钟，通过薄层色谱法（TLC）确定皮质醇转化为可的松的情况。由于在低转化率下TLC方法的不准确性，以及在转化率高于60-70%时11βHSD2的终产物抑制，仅考虑10%到60%之间的转化率进行计算。抑制常数IC50使用曲线拟合程序进行评估。结果以均值±标准误表示，并包括至少四个独立的测量。

 

　　MCE尚未独立确认这些方法的准确性，仅供参考。

 

　　细胞测定

 

　　细胞活性通过将转染的HEK-293细胞和CHO细胞与相应浓度的胆汁酸孵育1小时，并用台盼蓝染色进行分析。根据细胞增殖试剂盒I，使用四唑盐MTT（3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基四唑溴化物）分析胆汁酸的毒性。在两个测试中，对照组和胆汁酸处理组之间没有显著差异。

 

　　参考文献

 

　　[1]. Stauffer AT, et al. Chenodeoxycholic acid and deoxycholic acid inhibit 11 beta-hydroxysteroid dehydrogenase type 2 and cause cortisol-induced transcriptional activation of the mineralocorticoid receptor. J Biol Chem. 2002 Jul 19;277(29):26286-92

 

　　[2]. Casaburi I, et al. Chenodeoxycholic acid through a TGR5-dependent CREB signaling activation enhances cyclin D1 expression and promotes human endometrial cancer cell proliferation. Cell Cycle. 2012 Jul 15;11(14):2699-710

 

　　[3]. Kawabe Y, et al. The molecular mechanism of the induction of the low density lipoprotein receptor by chenodeoxycholic acid in cultured human cells. Biochem Biophys Res Commun. 1995 Mar 8;208(1):405-11.

 

　　[4]. Ao M, et al. Chenodeoxycholic acid stimulates Cl(-) secretion via cAMP signaling and increases cystic fibrosis transmembrane conductance regulator phosphorylation in T84 cells. Am J Physiol Cell Physiol. 2013 Aug 15;305(4):C447-56

 

　　[5]. Noh K, et al. Farnesoid X receptor activation by chenodeoxycholic acid induces detoxifying enzymes through AMP-activated protein kinase and extracellular signal-regulated kinase 1/2-mediated phosphorylation of CCAAT/enhancer binding protein β. Drug Metab