Azoxymethane偶氮甲烷AOM

　　Azoxymethane是一种结肠致癌物质，可导致DNA加合物的形成。

 

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　　Azoxymethane偶氮甲烷AOM的生物活性

 

　　体外研究

 

　　Azoxymethane是一种结肠致癌物，可导致DNA加合物的形成。在相同的蛋白质基础上，肝微粒体在NADPH依赖性Azoxymethane生物活化和N7-mG加合物形成方面比SI和结肠微粒体活跃得多。肝微粒体对氧化Azoxymethane的羟基化活性最高，其次是SI和结肠微粒体。

 

　　体内研究

 

　　Azoxymethane可用于动物建模，构建肿瘤模型。

 

　　无论何种菌株，氧化Azoxymethane产生的O6-mG和N7-mG的量在肝脏中最高，其次是近端和远端结肠，具有相似的水平，然后是十二指肠、空肠和回肠。结果表明，Azoxymethane诱导的SI和结肠中的DNA加合物形成不依赖于肝P450酶的生物激活。无论小鼠品系如何，在盐水处理小鼠的结肠中均未检测到异常隐窝病灶(ACF)；相比之下，在氧化Azoxymethane处理的所有三种品系小鼠中均检测到结肠ACF。氧化Azoxymethane处理的无胸腺小鼠的肿瘤发生率比类似处理的WT动物低约11倍。

 

　　Azoxymethane偶氮甲烷AOM的动物实验参考方法

 

　　激酶测定

 

　　进行Azoxymethane诱导的体外DNA加合物形成的测定。简单来说，微粒体（0.5至2.0 mg/mL）与小牛胸腺DNA（1 mg/mL）和Azoxymethane（200μM）共同孵育在总体积为1.0 mL的溶液中。该测定缓冲液由0.1 M Tris-HCl(pH 7.4)、1 mM EDTA、20 mM MgCl2、0.3 M KCl和1.5 mM NADPH组成。孵育在37°C的摇动水浴中进行60分钟。在前30分钟后增加30 nM的NADPH。通过添加0.5 mL冰冷的7.5 M酸酯终止反应。然后从组织匀浆中提取DNA。没有NADPH的情况下进行对照孵育。

 

　　动物给药

 

　　使用雄性、8至10周龄的WT-A/J、IECN-A/J和LCN-A/J小鼠（每组8只），分别用生理盐水或Azoxymethane（7.5 mg/kg体重，皮下注射）每周一次，连续3周给药。治疗后6周处死小鼠进行异常隐窝结节（ACF）检测。取出整个结肠，沿着结肠的整个长度作纵向切口，然后将其切成两段等长的部分，代表结肠的近端和远端部分。将这些切段浸入PBS中以去除粪便颗粒，然后在10%缓冲福尔马林的过滤纸之间平放至少24小时。随后，将结肠浸入新鲜制备的0.1%亚甲基蓝中10分钟，并简单冲洗去除多余染料。将结肠小心地置于显微镜载玻片上，黏膜面向上观察。两位调查者独立盲目计数整个结肠黏膜表面的ACF，并记录下来。

 

　　MCE尚未对这些方法的准确性进行独立确认。仅供参考。