β-淀粉样蛋白(25-35)别名Aβ25-35
2023-06-06 
MCE
β-Amyloid β-淀粉样蛋白（25-35）（Amyloid beta-peptide （25-35））是阿尔茨海默氏淀粉样蛋白β肽的Aβ（25-35） 片段，在培养细胞中显示出神经毒性活性。
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生物活性
体外研究
Aβ（25-35）肽的氨基酸序列为NH2-Gly-Ser-Asn-Lys-Gly-Ala-Ile-Ile-Gly-Leu-Met-COOH，其中第一个Gly代表25号氨基酸，最后一个Met代表35号氨基酸。淀粉样蛋白β肽（25-35）也首次在凝胶状态下进行了研究。采用振动吸收法和ECD法进行了对比研究。还利用振动吸收和VCD光谱研究了Aβ（25-35）肽膜的构象偏好。淀粉样蛋白β肽（25-35）诱导离体脑线粒体的凋亡效应和蛋氨酸-35的氧化还原状态，在诱导程序性细胞死亡途径和毒性事件中起关键作用。
β-淀粉样蛋白聚集指南（以下是我们推荐的方案。本协议仅提供了一个指南，应根据您的具体需求进行修改）。
1. 用冷六氟-2-丙醇（HFIP）溶解固体Aβ肽。肽在室温下孵育至少1小时，以建立单体化和结构随机化。
2. 通过蒸发除去HFIP，得到的肽作为膜在-20或-80℃保存。
3.将得到的膜在5 mM的无水DMSO中溶解，然后涡流稀释到适当的浓度和缓冲液（无血清和无酚红培养基）。
4. 4-8℃陈化48h。样品14000g, 4-8℃离心10min;可溶性低聚物在上清液中。将上清液稀释10-200倍进行实验。
方法因下游应用程序而异。
MCE尚未独立证实这些方法的准确性。仅供参考。
体内研究
大鼠脑室内注射Aβ25-35肽，随后每天给药1次复方丹参，连续23 d。采用Morris水迷宫和被动回避法监测大鼠的行为。采用Real - time PCR和Western blotting检测海马淀粉样蛋白前体蛋白（APP）、β-site APP cleaved enzyme-1（BACE1）、早老素-1（PS1）、胰岛素降解酶（IDE）和neprilysin（NEP）。阿尔茨海默病（AD）模型组存在空间学习和记忆障碍。与AD模型组相比，CDS和多奈哌齐可显著改善Morris水迷宫和被动回避任务中Aβ25-35肽诱导的记忆障碍（P < 0.05）和被动回避任务（P < 0.01）。
MCE尚未独立证实这些方法的准确性。仅供参考。
实验参考方法
细胞试验
细胞活力通过改进的MTS测定法确定，该测定法基于线粒体脱氢酶将四氮唑盐转化为分光光度法在490 nm可测量的甲醛产物。将PC12细胞以10 000个细胞/孔的密度镀于96孔板中，在完全培养基中保持16小时。然后用还原、氧化和去甲亮氨酸取代的蛋氨酸-35 （10 μM）作为100%细胞死亡的阳性对照，在不存在（对照）和存在40 μM Aβ（31-35）和Aβ（25-35）的条件下培养细胞。肽孵育48 h后，每孔加入20 μL MTS试剂（2.0 mg/mL）。然后将细胞在37°C的5% CO2培养箱中培养30-45分钟。加入25 μL 10%的SDS停止反应。用微孔板读取器在490 nm处读取。每个数据点都是通过三孔分析获得的。
MCE尚未独立证实这些方法的准确性。仅供参考。
动物实验
大鼠
选用雄性Sprague-Dawley大鼠54只（2月龄，300-350 g）。淀粉样蛋白β肽（25-35）以1mg /mL的浓度溶解在无菌蒸馏水中作为贮存液。以1 μL/min的速率向双侧脑侧脑室注入5 μL/侧的无菌蒸馏水（对照），聚集a β25-35 （2 μL/ μL）；针头放置5分钟，然后取出针头，将大鼠放在温暖的垫子上，直到唤醒它们。为确定a - β25-35处理大鼠的神经保护作用，将a - β25-35处理大鼠分别给予不同剂量的CDS和多奈哌齐治疗，每天1次，连续23天（包括行为测试持续时间）。采用Morris水迷宫和步进被动回避任务，研究CDS对a β25-35诱导的记忆障碍的影响。将所有大鼠随机分为6组：（a）载体1 （a β25-35）+载体2 （cd和多奈哌齐），（b）a β25-35+载体2（c） a β25-35+CDS （130 mg/kg）， （d） a β25-35+CDS （260 mg/kg），（e）a β25-35+CDS （520 mg/kg），（f） a β25-35+多奈哌齐（0.5 mg/kg）。大鼠脑室微输注Aβ25-35 （10 μg/侧）或其载药后第1天，分别给予CDS或多奈哌齐或载药2，每天1次，连续14天，Morris水迷宫开始前进行被动回避任务。
MCE尚未独立证实这些方法的准确性。仅供参考。
