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β-淀粉样蛋白(25-35)别名Aβ25-35

  β-Amyloid β-淀粉样蛋白(25-35)(Amyloid beta-peptide (25-35))是阿尔茨海默氏淀粉样蛋白β肽的Aβ(25-35) 片段,在培养细胞中显示出神经毒性活性。
 
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β-Amyloid (25-35)
 
  生物活性
 
  体外研究
 
  Aβ(25-35)肽的氨基酸序列为NH2-Gly-Ser-Asn-Lys-Gly-Ala-Ile-Ile-Gly-Leu-Met-COOH,其中第一个Gly代表25号氨基酸,最后一个Met代表35号氨基酸。淀粉样蛋白β肽(25-35)也首次在凝胶状态下进行了研究。采用振动吸收法和ECD法进行了对比研究。还利用振动吸收和VCD光谱研究了Aβ(25-35)肽膜的构象偏好。淀粉样蛋白β肽(25-35)诱导离体脑线粒体的凋亡效应和蛋氨酸-35的氧化还原状态,在诱导程序性细胞死亡途径和毒性事件中起关键作用。
 
  β-淀粉样蛋白聚集指南(以下是我们推荐的方案。本协议仅提供了一个指南,应根据您的具体需求进行修改)。
 
  1. 用冷六氟-2-丙醇(HFIP)溶解固体Aβ肽。肽在室温下孵育至少1小时,以建立单体化和结构随机化。
 
  2. 通过蒸发除去HFIP,得到的肽作为膜在-20或-80℃保存。
 
  3.将得到的膜在5 mM的无水DMSO中溶解,然后涡流稀释到适当的浓度和缓冲液(无血清和无酚红培养基)。
 
  4. 4-8℃陈化48h。样品14000g, 4-8℃离心10min;可溶性低聚物在上清液中。将上清液稀释10-200倍进行实验。
 
  方法因下游应用程序而异。
 
  MCE尚未独立证实这些方法的准确性。仅供参考。
 
  体内研究
 
  大鼠脑室内注射Aβ25-35肽,随后每天给药1次复方丹参,连续23 d。采用Morris水迷宫和被动回避法监测大鼠的行为。采用Real - time PCR和Western blotting检测海马淀粉样蛋白前体蛋白(APP)、β-site APP cleaved enzyme-1(BACE1)、早老素-1(PS1)、胰岛素降解酶(IDE)和neprilysin(NEP)。阿尔茨海默病(AD)模型组存在空间学习和记忆障碍。与AD模型组相比,CDS和多奈哌齐可显著改善Morris水迷宫和被动回避任务中Aβ25-35肽诱导的记忆障碍(P < 0.05)和被动回避任务(P < 0.01)。
 
  MCE尚未独立证实这些方法的准确性。仅供参考。
 
  实验参考方法
 
  细胞试验
 
  细胞活力通过改进的MTS测定法确定,该测定法基于线粒体脱氢酶将四氮唑盐转化为分光光度法在490 nm可测量的甲醛产物。将PC12细胞以10 000个细胞/孔的密度镀于96孔板中,在完全培养基中保持16小时。然后用还原、氧化和去甲亮氨酸取代的蛋氨酸-35 (10 μM)作为100%细胞死亡的阳性对照,在不存在(对照)和存在40 μM Aβ(31-35)和Aβ(25-35)的条件下培养细胞。肽孵育48 h后,每孔加入20 μL MTS试剂(2.0 mg/mL)。然后将细胞在37°C的5% CO2培养箱中培养30-45分钟。加入25 μL 10%的SDS停止反应。用微孔板读取器在490 nm处读取。每个数据点都是通过三孔分析获得的。
 
  MCE尚未独立证实这些方法的准确性。仅供参考
 
  动物实验
 
  大鼠
 
  选用雄性Sprague-Dawley大鼠54只(2月龄,300-350 g)。淀粉样蛋白β肽(25-35)以1mg /mL的浓度溶解在无菌蒸馏水中作为贮存液。以1 μL/min的速率向双侧脑侧脑室注入5 μL/侧的无菌蒸馏水(对照),聚集a β25-35 (2 μL/ μL);针头放置5分钟,然后取出针头,将大鼠放在温暖的垫子上,直到唤醒它们。为确定a - β25-35处理大鼠的神经保护作用,将a - β25-35处理大鼠分别给予不同剂量的CDS和多奈哌齐治疗,每天1次,连续23天(包括行为测试持续时间)。采用Morris水迷宫和步进被动回避任务,研究CDS对a β25-35诱导的记忆障碍的影响。将所有大鼠随机分为6组:(a)载体1 (a β25-35)+载体2 (cd和多奈哌齐),(b)a β25-35+载体2(c) a β25-35+CDS (130 mg/kg), (d) a β25-35+CDS (260 mg/kg),(e)a β25-35+CDS (520 mg/kg),(f) a β25-35+多奈哌齐(0.5 mg/kg)。大鼠脑室微输注Aβ25-35 (10 μg/侧)或其载药后第1天,分别给予CDS或多奈哌齐或载药2,每天1次,连续14天,Morris水迷宫开始前进行被动回避任务。
 
  MCE尚未独立证实这些方法的准确性。仅供参考。

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