Pirfenidone

　　Pirfenidone （AMR69） 是一种抗纤维化剂，可减弱纤维细胞中 CCL2 和 CCL12 的产生。Pirfenidone 具有抑制细胞生长的作用，并能降低人胶质瘤细胞系中的 TGF-β2 蛋白水平。Pirfenidone 还具有抗炎活性。

 

　　生物活性

 

　　体外研究

 

　　吡非尼酮 （PFD） 可降低基质金属蛋白酶 （MMP）-11 的蛋白质水平，基质金属蛋白酶 （MMP）-11 是一种 TGF-β 靶基因和与致癌作用有关的弗林蛋白酶底物。这些数据将 PFD 或 PFD 相关药物定义为与增强 TGF-β 活性相关的人类癌症的有希望的药物。在 RAW264.7 细胞（一种鼠类巨噬细胞样细胞系）中，吡非尼酮通过一种独立于 MAPK2、p38 MAPK 和 JNK 激活的翻译机制抑制促炎细胞因子 TNF-α。在小鼠内毒素休克模型中，吡非尼酮有效抑制促炎细胞因子 TNF-α、干扰素-γ 和白细胞介素 6 的产生，但增强抗炎细胞因子白细胞介素 10 的产生。吡非尼酮 （PFD） 显示出其对 HLEC 增殖的抑制作用。与对照组相比，0.3 mg/mL组24小时后细胞增殖减弱（P=0.044）。 0.5 mg/mL组在24、48、72小时效果更明显（P<0.05）。在所有时间点，1 mg/mL PFD 几乎完全抑制了增殖（P<0.01）

 

　　MCE 尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。

 

　　体内研究

 

　　吡非尼酮（300 mg/kg/天）给药 4 周。 当在博来霉素 （BLM） 治疗的小鼠中给药时，吡非尼酮显着降低了评分 （P<0.0001）。 此外，对肺中的胶原蛋白含量进行量化，以评估吡非尼酮的抗纤维化作用。 与生理盐水或吡非尼酮治疗的小鼠相比，BLM 治疗小鼠肺中的胶原蛋白含量显着增加，并且在 BLM 治疗后第 28 天服用吡非尼酮可显着减弱这种增加（P=0.0012）

 

　　实验参考方法

 

　　细胞检测

 

　　HLEC 在 α-MEM/10% FBS/1%NEAA 的 96 孔板（1×104 个细胞/孔）中接种 24 小时，并在无血清培养基中的固定管中培养 24 小时。然后去除培养基，将细胞浸泡在 α-MEM 中，其中 10% FBS 和 1% NEAA 补充有 0、0.01、0.1、0.2、0.3、0.5 或 1 mg/mL 吡非尼酮，持续 0、4、12、 24、48 或 72 小时。与 180 ?L α-MEM 和 20 ?L 5 mg/mL MTT 在 37°C 下孵育 4 小时后，弃去 MTT 溶液。通过在轨道摇床上以 200 rpm 搅拌培养皿 10 分钟，将 Formosan 沉淀物溶解在 180 ?L DMSO 中。用酶标仪读取每个孔中 490 nm 处的吸光度。我们通过使用 MTT 测定 将浓度细化为 0.2、0.25、0.3、0.4、0.5 和 0.6 mg/mL，进一步检查了 PFD 的影响。

 

　　MCE 尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。

 

　　动物实验

 

　　老鼠

 

　　使用九周大的雌性 C57BL/6 小鼠。植入渗透泵后口服吡非尼酮 14 天。给药量根据体重确定。将动物分为 4 组（n=6/组）：正常对照、BLM、吡非尼酮（300 mg/kg/天）和 BLM + 吡非尼酮。吡非尼酮剂量是根据其他地方发表的报告选择的。吡非尼酮也在治疗环境中从第 10 天开始给药，以评估药物对 BLM 模型小鼠纤维化阶段的影响。

 

　　MCE 尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。