Norepinephrine去甲肾上腺素的作用

　　去甲肾上腺素Norepinephrine (Levarterenol; L-Noradrenaline) 是一种有效的肾上腺素能受体 (AR) 激动剂。去甲肾上腺素Norepinephrine 可以激活 α1、α2、β1 受体。

 

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　　去甲肾上腺素Norepinephrine的生物活性

 

　　体外研究

 

　　去甲肾上腺素Norepinephrine (NE) 通常被认为是一种 β1-亚型选择性肾上腺素能激动剂，优于 β2-肾上腺素能受体。去甲肾上腺素Norepinephrine (NE) 在较高浓度下也对 β2-肾上腺素能受体具有直接活性[1]。

 

　　来自腹股沟脂肪垫 (iWA) 或肩胛间脂肪垫 (BA) 从新生野生型 C57BL/6J 小鼠中分离并培养。为了检查激活 AT2 对 β-肾上腺素能信号传导的影响，首先评估 cAMP 产生对 去甲肾上腺素Norepinephrine (NE，10 μM) 有或没有 CGP (10 nM) 联合处理的反应。

 

　　去甲肾上腺素Norepinephrine (NE) 增加 cAMP正如在 iWA 中预期的那样，CGP 不会改变这种效果

 

　　去甲肾上腺素Norepinephrine (NE) 也已知会诱导脂肪分解，并且需要释放的脂肪酸来功能性激活 UCP1 蛋白并刺激热量产生。在小鼠 iWA 中，去甲肾上腺素Norepinephrine (NE) 处理后 Ser133 处的 CREB 磷酸化增加，并且与 CGP 联合处理显著减弱[3]。

 

　　体内研究

 

　　诱导心肌病[5][6]

 

　　　　致病原理

 

　　　　去甲肾上腺素Norepinephrine 是心肌细胞的一种强效生长因子，通过在动物体内长期输注亚高压剂量的去甲肾上腺素Norepinephrine 可引起心肌质量和左心室壁厚度的增加。去甲肾上腺素Norepinephrine 通过 α1 和 β肾上腺素能刺激激活 raf-1 激酶/MAP 激酶级联，来自两个受体的信号通路协同诱导心肌细胞肥大。

 

　　　　具体造模方法

 

　　　　Rat: Spragues-Dawley rats • adult (6 months old) • Male &bull.

 

　　　　Administration: Each rat was continuously injected with 100 μg/kg/h or 200 μg/kg/h through an osmotic minipump.

 

　　造模成功指标

 

　　分子变化：显著增加左心室 Dnmt活性和Dnmt1、3a 和 3b 的表达。

 

　　显著增加左心室中胎儿基因 ANP、BNP 和 βMHC 的 mRNA 表达。

 

　　显著增加左心室 ROS 生成并以浓度依赖方式增加整体基因组 DNA 甲基化和左心室 PKCε 启动子区域 Egr-1 结合位点基因特异性 CpG 甲基化。

 

　　以浓度依赖性方式增加乳酸脱氢酶释放。

 

　　显著降低左心室发育压力和 dP/dtmax、诱导了肌营养蛋白的上调和四加半LIM域蛋白2 (FHL2) 的下调。

 

　　表型观测：增加心肌梗死面积并持续升高血压。

 

　　诱导心脏肥厚和心脏收缩力降低。

 

　　增加左心室体重。

 

　　实验参考方法

 

　　细胞测定[2]

 

　　来自一位38岁非糖尿病女性供体的皮下前脂肪细胞经过TERT和HPV E6/E7的永生化。在当前研究中，通过环克隆分离出一个具有一致分化能力的稳定二倍体克隆（称为克隆B）。细胞在前脂肪细胞PGM2培养基中生长。一旦细胞达到融合状态，便通过在含有地塞米松、IBMX、吲哚美辛和额外胰岛素的分化培养基中孵育来诱导分化。细胞分化持续10天。在处理之前，培养基更换为PGM2培养基一天，然后切换至无血清培养基过夜以进行处理。脂肪细胞用载体、去甲肾上腺素（NE, 10 μM）、CGP（10 nM）或去甲肾上腺素（NE）和CGP[2]联合处理6小时。

 

　　MCE尚未独立确认这些方法的准确性。这些方法仅供参考。

 

　　去甲肾上腺素Norepinephrine的溶解性数据

 

　　动物实验：

 

　　请根据您的 实验动物和给药方式 选择适当的溶解方案。

 

　　以下溶解方案都请先按照 In Vitro 方式配制澄清的储备液，再依次添加助溶剂：

 

　　——为保证实验结果的可靠性，澄清的储备液可以根据储存条件，适当保存；体内实验的工作液，建议您现用现配，当天使用；

 

　　以下溶剂前显示的百分比是指该溶剂在您配制终溶液中的体积占比；如在配制过程中出现沉淀、析出现象，可以通过加热和/或超声的方式助溶

 

　　方案 一

 

　　请依序添加每种溶剂： 10% DMSO  →  40% PEG300   →   5% Tween-80  →  45% Saline

 

　　Solubility: ≥ 2.08 mg/mL (12.29 mM); 澄清溶液

 

　　此方案可获得 ≥ 2.08 mg/mL（饱和度未知）的澄清溶液。

 

　　以 1 mL 工作液为例，取 100 μL 20.8 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀；再向上述体系中加入 50 μL Tween-80，混合均匀；然后再继续加入 450 μL 生理盐水 定容至 1 mL。

 

　　生理盐水的配制：将 0.9 g 氯化钠，溶解于 ddH₂O 并定容至 100 mL，可以得到澄清透明的生理盐水溶液。

 

　　方案 二

 

　　请依序添加每种溶剂： 10% DMSO  →  90% (20% SBE-β-CD in Saline)

 

　　Solubility: ≥ 2.08 mg/mL (12.29 mM); 澄清溶液

 

　　此方案可获得 ≥ 2.08 mg/mL（饱和度未知）的澄清溶液。

 

　　以 1 mL 工作液为例，取 100 μL 20.8 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 900 μL 20% 的 SBE-β-CD 生理盐水水溶液 中，混合均匀。

 

　　2 g SBE-β-CD（磺丁基醚 β-环糊精）粉末定容于 10 mL 的生理盐水中，完全溶解至澄清透明。

 

　　方案 三

 

　　请依序添加每种溶剂： 10% DMSO  →  90% Corn Oil

 

　　Solubility: ≥ 2.08 mg/mL (12.29 mM); 澄清溶液

 

　　此方案可获得 ≥ 2.08 mg/mL（饱和度未知）的澄清溶液，此方案实验周期在半个月以上的动物实验酌情使用。

 

　　以 1 mL 工作液为例，取 100 μL 20.8 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 900 μL玉米油中，混合均匀。

 

　　参考文献

 

　　[1]. Brian P Ramos, et al. Adrenergic pharmacology and cognition: focus on the prefrontal cortex. Pharmacol Ther. 2007 Mar;113(3):523-36. 

 

　　[2]. MacGregor DA, et al. Relative efficacy and potency of beta-adrenoceptor agonists for generating cAMP in human lymphocytes. Chest. 1996 Jan;109(1):194-200. 

 

　　[3]. Littlejohn NK, et al. Suppression of Resting Metabolism by the Angiotensin AT2 Receptor. Cell Rep. 2016 Aug 9;16(6):1548-60. 

 

　　[4]. Xinyu Xu, et al. Binding pathway determines norepinephrine selectivity for the human β 1 AR over β 2 AR. Cell Res. 2021 May;31(5):569-579. 

 

　　[5]. Xiao D, et al. "Inhibition of DNA methylation reverses norepinephrine-induced cardiac hypertrophy in rats." Cardiovascular research 101.3 (2014): 373-382. 

 

　　[6]. Yamazaki, et al. "去甲肾上腺素Norepinephrine induces the raf-1 kinase/mitogen-activated protein kinase cascade through both α1-and β-adrenoceptors." Circulation 95.5 (1997): 1260-1268.