R848-Resiquimod
2019-03-14 
MCE小分子
R848是一种Toll样受体7和8 (TLR7/TLR8) 的激动剂，诱导细胞因子如TNF-α，IL-6和IFN-α的上调。
MCE的所有产品仅用作科学研究，我们不为任何个人用途提供产品和服务
R848的体外
Resiquimod（R-848）诱导半抗原和过敏原特异性循环T细胞，包括TH2效应子，产生IFN-γ，甚至丧失产生IL-4的能力[2]。 Resiquimod（R848）以剂量依赖性方式增强PBL增殖，并增加BrdU掺入测定中BrdU阳性细胞的数量。 用R848处理的细胞显示出显着增加的（3.5倍）荧光素酶（NF-κB活性的报道基因）活性。
体内
Resiquimod（R-848）（50μg/只，im途径）显着上调SPF中IFN-α，IFN-β，IFN-γ，IL-1β，IL-4，iNOS和MHC-II基因的表达
Resiquimod溶剂和溶解性
体内：
1。逐个添加每种溶剂：10％DMSO 》90％（20％SBE-β-CD在盐水中）
溶解度：≥2.5mg / mL（7.95 mM）; 明确解决方案
2。逐个加入每种溶剂：10％DMSO》 90％玉米油
溶解度：≥2.5mg / mL（7.95 mM）; 明确解决方案
3。逐个添加每种溶剂：10％DMSO 》40％PEG300》 5％Tween-80》 45％盐水
溶解度：≥2.5mg / mL（7.95 mM）; 明确解决方案
激酶测定
对于荧光素酶测定，用萤火虫NF-κB特异性荧光素酶报告载体pNFκB-Met-Luc2转染FG-9307细胞。 通过与pSEAP2对照载体共转染来监测转染效率，所述pSEAP2对照载体组成型表达人分泌的增强的碱性磷酸酶（SEAP）。 然后用Resiquimod（R848,1μg/ mL），CQ（10μM），CQ加R848或PBS处理细胞，并在22℃温育24小时。 然后分别使用荧光素酶测定试剂盒和Great EscAPe TM SEAP化学发光检测试剂盒分析转染子的培养基的荧光素酶活性和SEAP活性。 该测定进行三次。
MCE尚未独立确认这些方法的准确性。 它们仅供参考。
细胞分析
为了抑制溶酶体酸化，在Resiquimod（R848）处理之前将细胞与10μMSQ一起温育1小时。 处理后，向板中加入20μL5mg/ mL MTT。 将板在22℃温育4小时，并向板中加入200μL二甲基亚砜以溶解还原的甲.. 然后用酶标仪在490nm处读板。 为了确定Myd88抑制对R848诱导的细胞增殖的影响，将Myd88抑制剂Pepinh-MYD和对照肽Pepinh-Control以50μM的浓度加入PBL中，并将板在22℃温育6小时。 温育后，用R848处理细胞，并如上进行MTT测定。 为了确定NF-κB失活对R848诱导的细胞增殖的影响，将BAY-11-7082（IκB-α磷酸化的不可逆抑制剂）以1μM的浓度添加到细胞中，并将板在22℃温育。 °C 1小时。 温育后，用R848处理细胞，并如前所述进行MTT测定。 所有实验均进行三次。
MCE尚未独立确认这些方法的准确性。 它们仅供参考。
MCE的所有产品仅用作科学研究，我们不为任何个人用途提供产品和服务
R848的体外
Resiquimod（R-848）诱导半抗原和过敏原特异性循环T细胞，包括TH2效应子，产生IFN-γ，甚至丧失产生IL-4的能力[2]。 Resiquimod（R848）以剂量依赖性方式增强PBL增殖，并增加BrdU掺入测定中BrdU阳性细胞的数量。 用R848处理的细胞显示出显着增加的（3.5倍）荧光素酶（NF-κB活性的报道基因）活性。
体内
Resiquimod（R-848）（50μg/只，im途径）显着上调SPF中IFN-α，IFN-β，IFN-γ，IL-1β，IL-4，iNOS和MHC-II基因的表达
Resiquimod溶剂和溶解性
体内：
1。逐个添加每种溶剂：10％DMSO 》90％（20％SBE-β-CD在盐水中）
溶解度：≥2.5mg / mL（7.95 mM）; 明确解决方案
2。逐个加入每种溶剂：10％DMSO》 90％玉米油
溶解度：≥2.5mg / mL（7.95 mM）; 明确解决方案
3。逐个添加每种溶剂：10％DMSO 》40％PEG300》 5％Tween-80》 45％盐水
溶解度：≥2.5mg / mL（7.95 mM）; 明确解决方案
激酶测定
对于荧光素酶测定，用萤火虫NF-κB特异性荧光素酶报告载体pNFκB-Met-Luc2转染FG-9307细胞。 通过与pSEAP2对照载体共转染来监测转染效率，所述pSEAP2对照载体组成型表达人分泌的增强的碱性磷酸酶（SEAP）。 然后用Resiquimod（R848,1μg/ mL），CQ（10μM），CQ加R848或PBS处理细胞，并在22℃温育24小时。 然后分别使用荧光素酶测定试剂盒和Great EscAPe TM SEAP化学发光检测试剂盒分析转染子的培养基的荧光素酶活性和SEAP活性。 该测定进行三次。
MCE尚未独立确认这些方法的准确性。 它们仅供参考。
细胞分析
为了抑制溶酶体酸化，在Resiquimod（R848）处理之前将细胞与10μMSQ一起温育1小时。 处理后，向板中加入20μL5mg/ mL MTT。 将板在22℃温育4小时，并向板中加入200μL二甲基亚砜以溶解还原的甲.. 然后用酶标仪在490nm处读板。 为了确定Myd88抑制对R848诱导的细胞增殖的影响，将Myd88抑制剂Pepinh-MYD和对照肽Pepinh-Control以50μM的浓度加入PBL中，并将板在22℃温育6小时。 温育后，用R848处理细胞，并如上进行MTT测定。 为了确定NF-κB失活对R848诱导的细胞增殖的影响，将BAY-11-7082（IκB-α磷酸化的不可逆抑制剂）以1μM的浓度添加到细胞中，并将板在22℃温育。 °C 1小时。 温育后，用R848处理细胞，并如前所述进行MTT测定。 所有实验均进行三次。
MCE尚未独立确认这些方法的准确性。 它们仅供参考。
