Olaparib奥拉帕尼

　　Olaparib （AZD2281; KU0059436） 是一种口服有效的 PARP 抑制剂，抑制 PARP-1 和 PARP-2 的 IC50 分别为 5 和 1 nM。Olaparib 是一种自噬 （autophagy） 和线粒体自噬 （mitophagy） 激活剂。

 

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　　生物活性

 

　　体外研究

 

　　Olaparib （AZD2281）是PARP-1和PARP-2的单位数纳米摩尔抑制剂，对brca1缺乏的乳腺癌细胞系具有独立的活性。将奥拉帕尼应用于SW620细胞裂解液，确定PARP-1抑制的IC50约为6 nM, PARP-1活性的总消融浓度为30 - 100 nM。

 

　　MCE尚未独立证实这些方法的准确性。仅供参考。

 

　　体内研究

 

　　携带SW620异种移植肿瘤的动物使用奥拉帕尼（10 mg/kg, p.o.）联合NSC 362856 （TMZ） （50 mg/kg, p.o.）治疗，每天一次，连续5天，之后肿瘤生长。奥拉帕尼增加DWC模型Calu-6肿瘤的血管灌注。单剂给药奥拉帕尼（50 mg/kg, p.o）（上图）或与放疗联合给药可使Calu-6肿瘤的荧光强度增加。

 

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　　实验参考方法

 

　　激酶试验

 

　　本实验测定了奥拉帕尼抑制PARP-1酶活性的能力。PARP-2活性抑制是通过PARP-1试验的变化来测量的，在96孔的白壁板上，PARP-2蛋白（重组）通过PARP-2特异性抗体结合。加入3H-NAD+ DNA后测定PARP-2活性。洗涤后，加入闪烁剂，测量3h加入的核糖化。对于tankyase -1，开发了AlphaScreen试验，其中his标记的重组TANK-1蛋白与生物素化的NAD+在384孔ProxiPlate试验中孵育。添加α珠结合HIS和生物素标签以产生接近信号，而TANK-1活性的抑制与该信号的损失直接成比例。所有实验至少重复三次

 

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　　细胞试验

 

　　PF50值为增强因子，其计算方法为添加烷基化剂甲基甲烷磺酸盐（MMS）后控制生长的IC50与添加PARP抑制剂后MMS的IC50之比。使用HeLa B细胞，奥拉帕尼在固定的200 nM浓度下进行MMS筛选。用于检测Olaparib对SW620结直肠细胞系的作用，使用的浓度分别为1、3、10、100和300 nM。细胞生长通过使用硫代hodamine B （SRB）测定来评估。

 

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　　动物实验

 

　　老鼠

 

　　肿瘤面积220 ~ 250 mm3的小鼠随机分为4组（n=5）： A;对照（PBS中添加10% DMSO /10% 2-羟基丙基-β-环糊精，每日灌胃5天），B;奥拉帕尼（50 mg/kg，每日，口服灌胃5天），C;10 Gy分割放疗（每天2 Gy，持续5天），D;奥拉帕尼和10 Gy （5×2 Gy）分次放疗（每天2 Gy剂量的放疗前30分钟给予奥拉帕尼）。每天测量肿瘤体积，直到达到1000 mm3。从治疗开始到每个肿瘤大小翻四倍的天数（相对肿瘤volume×4;RTV4）计算各组肿瘤个体的RTV4。

 

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