SR9009是REV-ERBα/β 激动剂

    SR9009 是 REV-ERBα/β 激动剂，抑制 REV-ERBα 和 REV-ERBβ 的 IC50 分别为 670 nM 和 800 nM

    SR9009的生物活性

    体外

    SR9009剂量依赖性地增加在表达嵌合Gal4 DNA结合结构域（DBD）-REV-ERB配体结合结构域（LBD）α或β的HEK293细胞中评估的REV-ERB依赖性阻遏物活性和Gal4响应性荧光素酶报告基因（SR9009： REV-ERBαIC50 = 670nM，REV-ERBβIC50 = 800nM）。 SR9009使用全长REV-ERBα以及由Bmal1启动子驱动的荧光素酶报告基因（IC50 = 710nM）在共转染测定中有效且有效地抑制转录。 SR9009以REV-ERBα/β依赖性方式抑制HepG2细胞中BMAL1 mRNA的表达。 SR9009与REV-ERBα的直接结合也使用圆二色分析（Kd = 800 nM）确认。

    体内

    虽然处理的压力和每日两次的注射导致载体处理的对照体重减轻，但SR9009处理的动物的体重减轻了60％。 SR9009（100mg / kg，i.p。）处理的小鼠表现出更严重的肥胖减少。 在SR9009处理的动物中，血浆非酯化脂肪酸（NEFA）也与血浆葡萄糖（19％）一起减少（23％）。 在白色脂肪组织（WAT）中，SR9009处理导致编码参与甘油三酯（TG）合成的酶的基因表达降低，这在瘦小鼠中也观察到

    SR9009的实验参考方法

    细胞分析

    HEK293细胞在96孔板（1×106 /孔）中生长，并使用Lipofectamine瞬时转染。 每孔总共200 ng DNA转染细胞，由pGL4 mIL-17萤火虫荧光素酶报告基因构建体，pGL4 mIL-17 + CNS-5萤火虫荧光素酶报告基因构建体或pGL4 mIL-17 2kB RORE突变体组成（100 ng /孔），肌动蛋白启动子Renilla reniformis荧光素酶报告基因（50ng /孔），单独的对照载体或测试DNA（全长RORα或50ng /孔的全长RORγ）。 在特异性测定中表示所有48种人核受体，并且以20μM的浓度测试SR9009。 该测定的形式是在HEK293细胞中具有Gal4 DNA结合域 - 核受体融合的共转染测定。

    MCE尚未独立确认这些方法的准确性。 它们仅供参考。

    动物实验研究

    小鼠

    对于昼夜节律基因表达实验，将雄性C57BL6小鼠（8-10周龄）维持在L：D（12小时：12小时）周期或恒定黑暗。 在昼夜节律时间（CT）给动物施用单剂量的100mg / kg SR9009或SR9011（i.p。），并在CT0，CT6，CT12和CT18处死动物组（n = 6）。 基因表达由实时QPCR确定。