DMAT抑制剂

    DMAT 是一种有效的，特异性的 CK2 抑制剂，IC50 值为 130 nM。

 

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    DMAT的生物活性

 

    体外

 

    与亲本抗雌激素敏感的MCF-7细胞相比，DMAT（1μM-2.5μM）DMAT在杀死抗雌激素抗性细胞方面更有效。抗雌激素抗性细胞的DMAT诱导的细胞死亡由半胱天冬酶介导。DMAT抑制CK2活性，但在三种细胞系MCF-7，TAMR-1和182R-6中抑制作用相似。与对照相比，DMAT在10 -4和10 -5 mol / Las 浓度下对H295R细胞增殖有影响。DMAT（100μM）显着增加H295R细胞的凋亡。与对照相比，DMAT（1 nM-1μM）显着降低醛固酮释放到72小时H295R细胞培养物的上清液中[2]。DMAT还通过与ATP竞争的机制抑制PIM1，并且它是除CK2之外的强激酶抑制剂

 

    在体内

 

    体内DMAT应用通过干扰肿瘤细胞增殖来减少异种移植模型中的肿瘤生长。DMAT给药后的生化参数和组织学显示肝组织无改变。

 

    DMAT的实验参考方法

 

    激酶测定

 

    0.1微克/微升的蛋白质提取物，500μMCK2底物肽（RRRDDDSDDD），25毫摩尔Tris-HCL，pH 8.5中，100μM的Na：激酶活性试验在含有（终浓度）加入50μL的体积进行3 VO 4，1毫DTT，20mM的氯化钠，5毫摩尔MgCl 2，50μMATP和APPR 1微居里[γ- 32 P] -ATP（3000次/毫摩尔）。将样品在30℃下温育10分钟。将等分试样点在P81磷酸纤维素纸上，并在0.75％磷酸中洗涤3×5分钟，在丙酮中洗涤一次。通过在液体闪烁计数器中计数样品来测量放射性标记的磷酸盐的掺入。进行三次独立实验，每次重复一次，具有可重复的结果。

 

    MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。

 

    细胞分析

 

    H295R细胞以2×10的密度铺板4  个细胞/孔在96孔微量培养板中的完全培养基中预温育和12个小时（5％CO 2，37℃，95％湿度）。将96％乙醇和无血清培养基中的DMAT加入到适当的孔中，终浓度为10 -4 -10 -10  M（10 -4  M孔中乙醇的最高浓度为1.8％[vol]））。将相同体积的无Nu-Serum培养基和96％乙醇以与10 -4  M组中的溶剂相同的浓度加入对照孔中。在标准条件下（5％CO 2）孵育72小时，37℃，95％湿度）。用酶联免疫吸附测定（ELISA）酶标仪在450nm波长下测量每个样品的吸光度（OD，光密度）

 

    MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。