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Nutlin (3a)

    Nutlin 3a 是 Nutlin-3 的活性异构体,为一种鼠双微体 2 (MDM2) 抑制剂,抑制 MDM2-p53 相互作用,且稳定 p53 蛋白,因此诱导细胞周期停滞和细胞凋亡。
 
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    生物活性
 
    体外
 
    作为TP53野生型卵巢癌的治疗化合物,Nutlin 3a(Nutlin-3a)是抑制MDM2,激活野生型p53和诱导细胞凋亡的治疗剂。具有野生型TP53的三种细胞系(HOC-7,OVCA429和A2780)对Nutlin 3a(IC 50 = 4至6μM)高度敏感。SKOV3细胞对Nutlin 3a 的IC 50为38μM。剩下的两个都是TP53野生型的卵巢透明细胞系(TOV21G和OVAS )比TP53突变细胞系对Nutlin 3a(分别为IC 50 = 14和25μm)的生长抑制相对更敏感。Nutlin 3a(Nutlin-3a)是Nutlin-3的活性对映体。Nutlin 3a是高度选择性的MDM2拮抗剂和p53诱导剂。与10μMNutlin 3a孵育7天后,NIH / 3T3细胞的生长受到了90%以上的抑制,但不影响MEF的增殖,而MEF的两个靶均被消除。Nutlin 3a有效阻止了所有细胞系的细胞周期进程,将S期隔室消耗至0.2-2%,并增加了G 1和G 2 / M 相隔室,表明G 1和G 2逮捕。添加Nutlin 3a后3 h,p53靶标p21和MDM2显着升高,并在8 h达到最高水平。Nutlin 3a在40 h后诱导约60%的SJSA-1和MHM细胞凋亡,并在60 h后进一步增加(分别为85%和65%)。
 
    体内
 
    Nutlin 3a(Nutlin-3a)在所有模型中均有效,平均肿瘤生长抑制率≥98%。Nutlin 3a以剂量依赖的方式抑制异种移植物的生长,最高剂量(200 mg / kg)显示出明显的肿瘤缩小(八个部分和一个完全消退)。已建立的具有Nutlin 3a的SJSA-1和MHM骨肉瘤异种移植物导致广泛的肿瘤消退。
 
    实验参考方法
 
    细胞分析
 
    将所有15个细胞系以1×10 3个细胞/ 孔的密度接种在96孔板中。24小时后,更换培养基,并用递增浓度的Nutlin 3a(1μM,5μM,10μM,25μM,50μM和70μM)处理细胞。孵育72小时后,将WST-1加入每个孔中,并使用酶标仪(酶标仪)以450 nm的吸光度测量剩余的活细胞数。根据需要以较小滴度的Nutlin 3a重复实验,以确定细胞系的确切IC 50。定义了IC 50。再次以与上述相同的方式铺板,并在其各自的IC 50下用Nutlin 3a处理,然后在24、48和72h加入WST-1并进行细胞活力测量.
 
    MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。
 
    动物管理局
 
    小鼠
 
    每天向小鼠口服带有sc肿瘤异种移植物的裸鼠(SJSA-1,LnCaP和22Rv1研究中每组10只小鼠,MHM研究中每组15只小鼠)每天口服两次Nutlin 3a(50-200 mg / kg)或媒剂(1%Klucel,0.1%Tween 80)2周(22Rv1和LnCap)或3周(SJSA-1和MHM)。用卡尺测量肿瘤体积并计算。对于Western印迹分析,将具有SJSA-1肿瘤(200-400 mm 3)的裸鼠(每组三只动物)以150 mg / kg的剂量(分别在0、8和24小时)使用三剂量的Nutlin 3a进行治疗最后一次给药后3小时收集肿瘤,将肿瘤样品速冻并处理。
 
    MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。

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