Coelenterazine

　　Coelenterazine 是 apoaequorin 和 Renilla 荧光素酶的发光酶底物。Renilla 荧光素酶和底物 coelenterazine 被用作生物发光共振能量转移 （BRET） 中检测蛋白质-蛋白质相互作用的生物发光供体。Coelenterazine 是一种超氧阴离子敏感化学发光探针，其也用于过氧亚硝酸盐的化学发光检测 。

 

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　　生物活性

 

　　体外

 

　　瞬时表达海肾荧光素酶（RLuc）的HCT-8对照细胞由于P-糖蛋白介导的腔肠素外排转运而显示出较低的生物发光。相比之下，瞬时表达的RLuc HCT-8细胞，其中P-糖蛋白被shRNAi下调，显示出高生物发光

 

　　体内

 

　　通过静脉内给动物注射腔肠素（2 mg / kg）并将其暴露于5分钟后的电荷耦合器件（CCD）相机中，监测HCC1806-RR的体内生长潜力。Rluc活性被检测为从肿瘤细胞发出的光，并以叠加在动物黑白照片上的伪彩色图像获得。所有小鼠在主要部位均表现出非常高的Rluc活性，而大多数小鼠同时表现出腹股沟ILN转移[4].

 

　　实验参考方法

 

　　细胞测定

 

　　细胞以5×10的密度铺板4每孔细胞数进入24孔板，并生长至80-100％汇合。在即将成像之前，将介质更改为无色溶液，其中包含（以mM为单位）：2.7 KCl，139 NaCl，8.1 Na2高压氧4，0.7小时2O，1.5 KH2PO4，1.8氯化钙2，1氯化镁2和5.5 d-葡萄糖。在不存在或不存在Pgp调节剂的情况下，将细胞预孵育15分钟，然后将腔肠素（终浓度为470 nM）直接添加到细胞中

 

　　MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。

 

　　动物实验方法

 

　　在从静脉注射稀释于磷酸钠缓冲液（50 mM）中的乙醇储备中配制的腔肠素（4μg/ g）尾静脉注射之前，用甲氧烷或异氟烷麻醉小鼠。注射后第2、6、8和11分钟，在体内成像系统上进行生物发光成像。在成像过程中通过2.5％异氟烷的鼻锥递送来维持麻醉。成像后，动物因颈脱位而被杀死；然后收集肿瘤并称重

 

　　MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。