Forskolin的作用
2019-03-14 
MCE小分子
Forskolin 是一种有效的 腺苷酸环化酶 激活剂，结合到 I 型腺苷酸环化酶 IC50 为 41 nM，激活 I 型腺苷酸环化酶 EC50 为 0.5 μM。
MCE 的所有产品仅用作科学研究，我们不为任何个人用途提供产品和服务
Forskolin的生物活性研究
体外
Forskolin（Fsk）是一种从Coleus forskholii中分离的天然二萜，通过其催化亚基直接激活腺苷酸环化酶（AC），以增加环腺苷一磷酸（cAMP）的细胞内水平[1]。 Forskolin（Fsk）影响人T细胞系的增殖，例如Kit 225和MT-2。 Forskolin处理以剂量依赖性方式抑制Kit 225和MT-2细胞的增殖，IC 50等于~5μMFsk。 Forskolin处理（10-100μM）使cAMPi水平增加?基础水平的5至20倍，达到50-100μMForskolin之间的最大水平。
体内
Forskolin（Fsk）治疗的Mrp4 - / - 小鼠显示Ki67阳性和切割的半胱天冬酶3阳性EC数量增加，周细胞覆盖量显着减少，空袖数量减少。 在暴露于从P7到P12的高氧（75％氧）的幼鼠中，Mrp4 - / - 小鼠显示未血管化的视网膜区域显着增加。 健康大鼠组的平均血糖为102.12±1.94 mg / dL，对照组为101.25±3.56，毛喉素组为103±2.08。 数据显示，研究结束时葡萄糖水平在毛喉素组中较低，根据应用的统计学检验有显着差异（p = 0.03）。
Forskolin的溶剂和溶解度
体外：
DMSO：≥32mg / mL（77.95 mM）
*“≥”表示可溶，但饱和度未知。
*请参阅溶解度信息以选择合适的溶剂。
Forskolin的实验参考方法
激酶测定
对于Jak3激酶测定，将Fsk处理的MT-2细胞裂解，澄清，并使用Jak3抗体进行免疫沉淀。 激酶反应在30℃下进行20分钟。 对于PKA激酶测定，裂解未处理的MT-2细胞，并将Jak3免疫沉淀并与PAS珠结合。 免疫沉淀的Jak3用激酶缓冲液（50mM Hepes-NaOH（pH 7.4），10mM MgCl 2,0.5mM EGTA，0.5mM DTT，20μg/ mL抑肽酶，10μg/ mL亮肽素，1μg/ mL胃蛋白酶抑制剂A）洗涤。 与200μMATP和纯化的蛋白激酶A催化亚基（PKAc）一起温育，如图例中所示。 激酶反应在32℃下进行30分钟，然后用冷激酶洗涤缓冲液剧烈洗涤珠子。 对于使用重组Jak3的[γ-32P] ATP放射性标记的激酶测定，根据制造商的说明，使用Lipofectamine 2000，用野生型（WT）Jak3或激酶死亡的Jak3K855A转染Hek293细胞。 裂解细胞并用Jak3抗体免疫沉淀。 将Jak3结合的PAS珠在冷裂解缓冲液中洗涤三次，然后用激酶缓冲液洗涤。 通过向Jak3结合的PAS珠反应混合物中添加10μCi[γ-32P] ATP，10μM未标记的ATP和1μg纯化的PKAc来启动激酶反应。 激酶反应在32℃下进行30分钟。 将Jak3结合的PAS珠子在放射免疫测定缓冲液（10mM Tris-HCl，pH 7.4,75mM NaCl，20mM EDTA，10mM EGTA，20mM Na 4 P 2 O 7,50mM NaF，20mM 2-甘油磷酸盐，1mM）中洗涤三次。 对硝基苯磷酸盐，0.1％Triton X-100）和一次在激酶洗涤缓冲液中。 通过加入2×SDS-PAGE样品缓冲液然后SDS-PAGE终止反应。 从PVDF膜上切下考马斯可染色的Jak3条带并进行磷酸氨基酸分析。
MCE尚未独立确认这些方法的准确性。 它们仅供参考。
细胞分析
将静止试剂盒225或MT-2细胞以每孔5×10 4个细胞接种到96孔板中。 然后用1％DMSO（载体）或毛喉素在1,5,10,25,50和100μM浓度下预处理细胞1小时。 用IL-2刺激细胞并在37℃下再培养20小时。 对照细胞用1％DMSO处理20小时。 在最后4小时的孵育期间，用[3H]胸苷以0.5μCi/200μL的浓度脉冲细胞。 将细胞收获到玻璃纤维滤器上并使用液体闪烁计数进行分析
MCE尚未独立确认这些方法的准确性。 它们仅供参考。
Animal Administration
小鼠
使用C57BL / 6J小鼠。 Mrp4敲除小鼠，建立并反复与C57BL / 6J小鼠回交。 在出生后第4天（P4）和第5天（P5）将毛喉素腹膜内注射入新生小鼠。 注射DMSO的小鼠作为对照。 处理的小鼠在P6处安乐死，并且分离它们的视网膜用于整装免疫组织化学（IHC）。 首先测试不同浓度的毛喉素对存活率和视网膜脉管系统的影响，确定最佳浓度，P4时为1.0μg/50μL（0.3 mg / kg），1.5μg/50μL（0.5 mg / kg） 在P5，用于比较WT小鼠和Mrp4缺陷小鼠之间的视网膜血管表型。
大鼠
雄性Wistar大鼠，年龄10-14周龄，平均体重300g±50g，分为四组; 19实验诱导发展为糖尿病，8保持健康状态。 糖尿病和健康大鼠均不接受Forskolin（对照），或每天6mg / kg的Forskolin，口服给药8周。 在毛喉素治疗之前和之后，在每组中测定血糖水平。 在确认存在糖尿病（诱导后三周）和指定治疗八周后两周测试糖尿病大鼠。
MCE尚未独立确认这些方法的准确性。 它们仅供参考。
MCE 的所有产品仅用作科学研究，我们不为任何个人用途提供产品和服务
Forskolin的生物活性研究
体外
Forskolin（Fsk）是一种从Coleus forskholii中分离的天然二萜，通过其催化亚基直接激活腺苷酸环化酶（AC），以增加环腺苷一磷酸（cAMP）的细胞内水平[1]。 Forskolin（Fsk）影响人T细胞系的增殖，例如Kit 225和MT-2。 Forskolin处理以剂量依赖性方式抑制Kit 225和MT-2细胞的增殖，IC 50等于~5μMFsk。 Forskolin处理（10-100μM）使cAMPi水平增加?基础水平的5至20倍，达到50-100μMForskolin之间的最大水平。
体内
Forskolin（Fsk）治疗的Mrp4 - / - 小鼠显示Ki67阳性和切割的半胱天冬酶3阳性EC数量增加，周细胞覆盖量显着减少，空袖数量减少。 在暴露于从P7到P12的高氧（75％氧）的幼鼠中，Mrp4 - / - 小鼠显示未血管化的视网膜区域显着增加。 健康大鼠组的平均血糖为102.12±1.94 mg / dL，对照组为101.25±3.56，毛喉素组为103±2.08。 数据显示，研究结束时葡萄糖水平在毛喉素组中较低，根据应用的统计学检验有显着差异（p = 0.03）。
Forskolin的溶剂和溶解度
体外：
DMSO：≥32mg / mL（77.95 mM）
*“≥”表示可溶，但饱和度未知。
*请参阅溶解度信息以选择合适的溶剂。
Forskolin的实验参考方法
激酶测定
对于Jak3激酶测定，将Fsk处理的MT-2细胞裂解，澄清，并使用Jak3抗体进行免疫沉淀。 激酶反应在30℃下进行20分钟。 对于PKA激酶测定，裂解未处理的MT-2细胞，并将Jak3免疫沉淀并与PAS珠结合。 免疫沉淀的Jak3用激酶缓冲液（50mM Hepes-NaOH（pH 7.4），10mM MgCl 2,0.5mM EGTA，0.5mM DTT，20μg/ mL抑肽酶，10μg/ mL亮肽素，1μg/ mL胃蛋白酶抑制剂A）洗涤。 与200μMATP和纯化的蛋白激酶A催化亚基（PKAc）一起温育，如图例中所示。 激酶反应在32℃下进行30分钟，然后用冷激酶洗涤缓冲液剧烈洗涤珠子。 对于使用重组Jak3的[γ-32P] ATP放射性标记的激酶测定，根据制造商的说明，使用Lipofectamine 2000，用野生型（WT）Jak3或激酶死亡的Jak3K855A转染Hek293细胞。 裂解细胞并用Jak3抗体免疫沉淀。 将Jak3结合的PAS珠在冷裂解缓冲液中洗涤三次，然后用激酶缓冲液洗涤。 通过向Jak3结合的PAS珠反应混合物中添加10μCi[γ-32P] ATP，10μM未标记的ATP和1μg纯化的PKAc来启动激酶反应。 激酶反应在32℃下进行30分钟。 将Jak3结合的PAS珠子在放射免疫测定缓冲液（10mM Tris-HCl，pH 7.4,75mM NaCl，20mM EDTA，10mM EGTA，20mM Na 4 P 2 O 7,50mM NaF，20mM 2-甘油磷酸盐，1mM）中洗涤三次。 对硝基苯磷酸盐，0.1％Triton X-100）和一次在激酶洗涤缓冲液中。 通过加入2×SDS-PAGE样品缓冲液然后SDS-PAGE终止反应。 从PVDF膜上切下考马斯可染色的Jak3条带并进行磷酸氨基酸分析。
MCE尚未独立确认这些方法的准确性。 它们仅供参考。
细胞分析
将静止试剂盒225或MT-2细胞以每孔5×10 4个细胞接种到96孔板中。 然后用1％DMSO（载体）或毛喉素在1,5,10,25,50和100μM浓度下预处理细胞1小时。 用IL-2刺激细胞并在37℃下再培养20小时。 对照细胞用1％DMSO处理20小时。 在最后4小时的孵育期间，用[3H]胸苷以0.5μCi/200μL的浓度脉冲细胞。 将细胞收获到玻璃纤维滤器上并使用液体闪烁计数进行分析
MCE尚未独立确认这些方法的准确性。 它们仅供参考。
Animal Administration
小鼠
使用C57BL / 6J小鼠。 Mrp4敲除小鼠，建立并反复与C57BL / 6J小鼠回交。 在出生后第4天（P4）和第5天（P5）将毛喉素腹膜内注射入新生小鼠。 注射DMSO的小鼠作为对照。 处理的小鼠在P6处安乐死，并且分离它们的视网膜用于整装免疫组织化学（IHC）。 首先测试不同浓度的毛喉素对存活率和视网膜脉管系统的影响，确定最佳浓度，P4时为1.0μg/50μL（0.3 mg / kg），1.5μg/50μL（0.5 mg / kg） 在P5，用于比较WT小鼠和Mrp4缺陷小鼠之间的视网膜血管表型。
大鼠
雄性Wistar大鼠，年龄10-14周龄，平均体重300g±50g，分为四组; 19实验诱导发展为糖尿病，8保持健康状态。 糖尿病和健康大鼠均不接受Forskolin（对照），或每天6mg / kg的Forskolin，口服给药8周。 在毛喉素治疗之前和之后，在每组中测定血糖水平。 在确认存在糖尿病（诱导后三周）和指定治疗八周后两周测试糖尿病大鼠。
MCE尚未独立确认这些方法的准确性。 它们仅供参考。
