Evofosfamide(TH-302)

    Evofosfamide(TH-302)是一种缺氧(hypoxia)激活前药，缺氧 (N2) 和常氧 (21% O2) 环境下，IC50 分别为 10 μM 和 1000 μM。

 

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    Evofosfamide的生物活性

 

    体外研究

 

    Evofosfamide（TH-302）诱导γH2AX和细胞凋亡。Evofosfamide显示缺氧选择性和浓度依赖性细胞毒活性，在p53-熟练和缺乏细胞中均具有相当的性。单独使用Evofosfamide（TH-302）治疗会导致G 2 / M细胞积聚。用Evofosfamide处理的细胞中PF47736对Chk1的抑制减少了常氧和缺氧下的Evofosfamide（TH-302）介导的G 2 / M停滞。

 

    体内研究

 

    Evofosfamide（TH-302）是一种缺氧激活的前药，已知可在实体瘤中常见的低氧条件下选择性激活。在Hs766t肿瘤中，Evofosfamide（TH-302）处理的小鼠的归一化K trans的平均值降低69.2％，对于Mia PaCa-2肿瘤降低46.1％，在SU.86.86肿瘤中降低4.9％。与他们自己的对照组相比，Hs766t和Mia PaCa-2治疗组的两种变化均具有统计学意义（P <0.01）[2]。95％氧气呼吸后，低氧组分（HF）显着降低至2.1％±4.7％（P <0.001），而7％氧气呼吸显着增加HF至29.5％±14.7％（P = 0.029）。暴露携带横纹肌肉瘤的大鼠增加氧气条件可以消除TH-302的作用，并将T4×SV从20.4±3.5降低到15.3±2.5天（P = 0.007），而对照动物的T4×SV增加。与放射治疗相结合后，TH-302治疗肿瘤的T4×SV从30.8±5.9（Evofosfamide（TH-302）+放疗）降至25.7±2.9天（Evofosfamide（TH-302）+放疗+ 95％O 2）。

 

    Evofosfamide的溶剂溶解度

 

    体内：

 

    请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解方案，配制前请先配制澄清的储备液，再依次添加助溶剂 (为保证实验结果的可靠性，体内实验的工作

 

    液，建议您现用现配，当天使用；澄清的储备液可以根据储存条件，适当保存；以下溶剂前的百分比是指该溶剂在您配制终溶液中的体积占比)：

 

    1、请依序添加每种溶剂： 10% DMSO 》40％PEG300 》5％吐温-80 》45％生理盐水

 

    溶解度：≥2.5mg / mL（5.57 mM）; 明确解决方案

 

    2、请依序添加每种溶剂： 10% DMSO 》90％玉米油

 

    溶解度：≥2.5mg / mL（5.57 mM）; 明确解决方案

 

    3、请依序添加每种溶剂： 10% DMSO 》90％（生理盐水中20％SBE-β-CD）

 

    溶解度：≥2.5mg / mL（5.57 mM）; 明确解决方案

 

    *以上所有助溶剂都可在 MCE 网站选购。

 

    实验参考方法

 

    细胞分析

 

    在常氧（21％O 2）或缺氧（N 2）下，用0.1μMPF477736或AZD7762和Evofosfamide（TH-302）处理细胞2小时。洗涤后，在常氧条件下，在Chk1抑制剂存在下将细胞再培养22小时。将细胞固定在75％乙醇中，并使用细胞周期试剂和番石榴流式细胞术测定细胞周期分布。在常氧（21％O 2）或缺氧条件下，将HT-29细胞暴露于Evofosfamide（TH-302）e（8 nM，40 nM，200 nM，1μM和5μM）和0.1μMAZD77622小时（N 2）。洗涤后，在0.1μM的AZD7762存在下将细胞连续培养46小时。进行基于发光的半胱天冬酶活性测定。

 

    MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。

 

    Animal Administration

 

    小鼠

 

    5-6周龄的雌性SCID小鼠在左后腿皮下接种SU.86.86，Hs766t或Mia-PaCa2细胞（5×10 6）。允许肿瘤平均生长三周至平均大小~150mm 3。然后将小鼠随机化并置于组群中并用盐水（对照）或经腹膜内注射的Evofosfamide（TH-302）（50mg / kg）处理。共有34只小鼠接受了MR成像研究。SU.86.86组由5只TH-302处理的动物和5只对照动物组成; Mia-PaCa2由6种Evofosfamide处理和5只对照动物组成; Hs766t由7种经Evofosfamide处理和6只对照动物组成。当肿瘤达到2000mm 3时，处死动物。

 

    大鼠

 

    将同源横纹肌肉瘤R1肿瘤（1mm 3）皮下植入成年WAG / Rij大鼠的侧腹。在平均肿瘤体积为4.2cm 3（范围，2.0-8.1）时开始实验以确保稳定的HF。连续4天给予治疗，并且用腹膜内注射（ip; QD×4）和NaCl或Evofosfamide（TH-302）（25,50或75mg / kg）组成。在治疗开始之前，使用[ 18F] HX4。放射疗法在治疗的第3天以0,4,8或12Gy的单剂量施用，在NaCl或Evofosfamide（TH-302）注射后3小时，在氧气修饰后1小时施用。在PET成像和放射治疗期间，使用氯胺酮/甲苯噻嗪（ip分别为66.7和6.7mg / kg）的混合物麻醉大鼠。在治疗5天期间（1天PET成像，用Evofosfamide或载体注射4天），动物每天暴露于改变的氧浓度4小时以改变肿瘤的HF。烟酰胺（ip 500 mg / kg）和carbogen（95％氧气，5％CO 2）的氧气改性组合; 5升/分钟）由注射烟酰胺组成，30分钟后接触碳氢化合物呼吸3.5小时。在烟酰胺/碳水化合物处理的中间，施用NaCl / Evofosfamide。在最初2小时后用NaCl / Evofosfamide注射给予减少的氧气呼吸（7％，残留N 2 ; 2.5L /分钟）4小时。注射[ 18 F] HX4 PET示踪剂[平均18.8 MBq，范围7.1-25.1 MBq; 在氧气修饰结束前2小时给予使用静脉注射线（Venoflux 0.4mm G27）用10％肝素冲洗的侧尾静脉。在示踪剂注射后3小时进行PET成像。

 

    MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。