Coelenterazine h 腔肠素h

　　Coelenterazine h 腔肠素h (2-Deoxycoelenterazine) 是一种腔肠素衍生物，是一种 RLuc8 发光底物。Coelenterazine h 腔肠素h 对 Ca2+ 更敏感，因此为测量 Ca2+ 浓度的微小变化提供了一个有价值的工具 (Ex/Em = 437/466 nm)。

 

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　　生物活性

 

　　体外研究

 

　　1. 溶液制备[4]

 

　　1.1 原液制备

 

　　溶剂：甲醇或乙醇

 

　　浓度：10 mM (根据实验优化)。

 

　　1.2 工作液配制

 

　　用 PBS 或细胞培养基稀释至 10 µM (根据实验优化)。

 

　　注意：原液和工作液应立即配制并使用，避光保存。

 

　　2. 细胞染色

 

　　2.1 用 BRAC 或 G5A 转染 Hela 细胞。

 

　　2.2 将 10 µM Coelenterazine h 腔肠素h 加入细胞板。

 

　　2.3 将染料加样板放入细胞培养箱中孵育 1-4 小时 (根据实验优化)。

 

　　2.4 荧光显微镜检测 (Ex/Em = 437/466 nm)。

 

　　Coelenterazine h 腔肠素h (1-10 μM) 可用作 RLuc8 的发光底物[4]。

 

　　在 BRAC 的 Ca2+ 结合动力学测量中，将 5 nM BRAC 蛋白与 20 μM Coelenterazine h 腔肠素h 在不同浓度的 Ca2+ 缓冲液中快速混合后，在 1 kHz 下监测 BRAC 的 Venus (530 nm) 发射强度[4]。

 

　　参考文献

 

　　[4]. Kenta Saito, et al. Auto-luminescent genetically-encoded ratiometric indicator for real-time Ca2+ imaging at the single cell level. PLoS One. 2010 Apr 1;5(4):e9935.