C12FDG用于β-半乳糖苷酶检测的亲脂性绿色荧光底

　　C12FDG (5-Dodecanoylaminofluorescein di-β-D-Galactopyranoside) 是用于 β-半乳糖苷酶检测的亲脂性绿色荧光底物。C12-FDG 比 FDG (HY-101895) 对动物细胞 β-半乳糖苷酶的活性测定更敏感。

 

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　　生物活性

 

　　体外研究

 

　　指南 (以下是我们推荐的方案。此方案仅提供指南，应根据您的具体需求进行修改)。

 

　　荧光衰老相关β-半乳糖苷酶 (SA-β-Gal) 实验[2]：

 

　　1. 在 6、12、24 或 96 孔板中以 5×105 细胞/mL 的密度培养细胞过夜。按照您的常规方案孵育细胞。

 

　　2. 用 200 μL PBS 洗涤细胞一次，然后用 100 μL 固定液 (2% 甲醛/0.2% 戊二醛的蒸馏水) 在室温下固定 5 分钟。

 

　　3. 用200 μL PBS洗涤细胞2次，用100 μL 33 μM C12FDG (PBS，pH=6.0) 染色10分钟，再用200 μL Hoechst solution (1 μg/mL Hoechst 33342 (HY-15559) 在 PBS 中，pH 6.0) 10 分钟。

 

　　4.通过 20× 物镜和 360 nm (Hoechst 33342) 和 480 nm (C12FDG) 激发滤光片对这些细胞进行成像，并分别通过 460 nm 和 535 nm 发射滤光片进行监测。

 

　　溶解性数据

 

　　动物实验：

 

　　请根据您的 实验动物和给药方式 选择适当的溶解方案。

 

　　以下溶解方案都请先按照 In Vitro 方式配制澄清的储备液，再依次添加助溶剂：

 

　　——为保证实验结果的可靠性，澄清的储备液可以根据储存条件，适当保存；体内实验的工作液，建议您现用现配，当天使用；

 

　　以下溶剂前显示的百分比是指该溶剂在您配制终溶液中的体积占比；如在配制过程中出现沉淀、析出现象，可以通过加热和/或超声的方式助溶

 

　　方案 一

 

　　请依序添加每种溶剂： 10% DMSO  →  40% PEG300  →  5% Tween-80  →  45% Saline

 

　　Solubility: ≥ 1.25 mg/mL (1.46 mM); 澄清溶液

 

　　此方案可获得 ≥ 1.25 mg/mL（饱和度未知）的澄清溶液。

 

　　以 1 mL 工作液为例，取 100 μL 12.5 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀；再向上述体系中加入 50 μL Tween-80，混合均匀；然后再继续加入 450 μL 生理盐水 定容至 1 mL。

 

　　生理盐水的配制：将 0.9 g 氯化钠，溶解于 ddH₂O 并定容至 100 mL，可以得到澄清透明的生理盐水溶液。

 

　　方案 二

 

　　请依序添加每种溶剂： 10% DMSO  →  90% (20% SBE-β-CD in Saline)

 

　　Solubility: ≥ 1.25 mg/mL (1.46 mM); 澄清溶液

 

　　此方案可获得 ≥ 1.25 mg/mL（饱和度未知）的澄清溶液。

 

　　以 1 mL 工作液为例，取 100 μL 12.5 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 900 μL 20% 的 SBE-β-CD 生理盐水水溶液 中，混合均匀。

 

　　2 g SBE-β-CD（磺丁基醚 β-环糊精）粉末定容于 10 mL 的生理盐水中，完全溶解至澄清透明。

 

　　方案 三

 

　　请依序添加每种溶剂： 10% DMSO   →  90% Corn Oil

 

　　Solubility: ≥ 1.25 mg/mL (1.46 mM); 澄清溶液

 

　　此方案可获得 ≥ 1.25 mg/mL（饱和度未知）的澄清溶液，此方案实验周期在半个月以上的动物实验酌情使用。

 

　　以 1 mL 工作液为例，取 100 μL 12.5 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 900 μL玉米油中，混合均匀。

 

　　参考文献

 

　　[1]. Plovins A, et al. Use of fluorescein-di-beta-D-galactopyranoside (FDG) and C12-FDG as substrates for beta-galactosidase detection by flow cytometry in animal, bacterial, and yeast cells. Appl Environ Microbiol. 1994 Dec;60(12):4638-41.

 

　　[2]. Udono M, et al. Quantitative analysis of cellular senescence phenotypes using an imaging cytometer. Methods. 2012 Mar;56(3):383-8.