Dihydroethidium二氢乙锭

　　Dihydroethidium 又称为 DHE，是一种过氧化物指示剂。Dihydroethidium 可穿透细胞膜，形成荧光蛋白复合物，发出蓝色荧光。Dihydroethidium 进入细胞后主要定位于细胞膜、细胞质和细胞核，在细胞核的染色效果最强。Dihydroethidium 产生固有的蓝色荧光，最大激发波长为 370 nm，最大发射波长为 420 nm；Dihydroethidium 脱氢后和 RNA 或 DNA 结合产生红色荧光，最大激发波长为 300 nm，最大发射波长为 610 nm，在实际观察时也可以使用 535 nm 作为激发波长。

 

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　　生物活性

 

　　体外研究

 

　　一般方案

 

　　Dihydroethidium 工作液的制备

 

　　1.1 储备液的制备

 

　　取1mg Dihydroethidium 于0.31mL DMSO中，得到10mM Dihydroethidium。

 

　　注意：建议储备液在 -20℃或 -80℃避光保存，避免反复冻融。

 

　　1.2 Dihydroethidium 工作液的制备

 

　　稀释在无血清细胞培养基或PBS中加入1-10 μM的 Dihydroethidium 工作液。

 

　　注意：请根据实际情况调整 Dihydroethidium 工作液的浓度。

 

　　细胞染色

 

　　2.1 悬浮细胞：4℃，1000g离心3-5分钟，弃上清。PBS洗涤2次，每次5分钟。

 

　　贴壁细胞：弃去细胞培养基，加入胰蛋白酶解离细胞，制成单细胞悬液。在 4°C 下以 1000 g 离心 3-5 分钟，然后弃去上清液。PBS洗涤2次，每次5分钟。

 

　　2.2 加入1mL Dihydroethidium 工作液，室温孵育30分钟。

 

　　2.3 4℃，400g离心3-4分钟，弃上清。

 

　　2.4 PBS洗涤2次，每次5分钟。

 

　　2.5 用无血清细胞培养基或PBS重悬细胞，荧光显微镜或流式细胞仪检测。

 

　　储存：-20°C，1年，避光

 

　　注意事项

 

　　1. 建议将原液储存于 -20℃或 -80℃避光，避免反复冻融。

 

　　2.请根据实际情况调整 Dihydroethidium 工作液的浓度。

 

　　3.本品供研发使用

 

　　4. 为了您的安全和健康，请穿着实验服和一次性手套操作。