丝氨酸蛋白酶Proteinase K蛋白酶K
2024-04-08 
MCE
Proteinase K (Protease K) 是可用于蛋白消化的一种非特异性丝氨酸蛋白酶。Proteinase K 在有 SDS 或尿素存在的情况下，在很大 pH 值 (4-12)、盐浓度和温度单位内均有活性。Proteinase K 可用于改进提取和检测病毒核酸的方法。
MCE 的所有产品仅用作科学研究或药证申报，我们不为任何个人用途提供产品和服务
生物活性
体外研究
Proteinase K酶可用于断开MTX和BSA之间的酰胺键，以及BSA结构中的酰胺键。
指导方针（以下是我们推荐的方案。此方案仅提供指导，应根据您的具体需求进行修改）。
具有优越蛋白降解性质的Proteinase K可以在无需RNA提取的情况下直接检测接种病毒转运培养基（VTM）中的SARS-COV2病毒组分。
SARS-CoV2 rRTPCR检测方案：
1、将每个SARS-COV2样本的VTM分离到三个EP管中（每管45μL）；
2、加入2.5µL（20 mg/mL浓度）的Proteinase K (PK)，使PK的最终浓度约为1 mg/ml VTM；
3、在25℃孵育5分钟；
4、在60℃孵育15分钟；
5、在98℃孵育10分钟，并将样品存储在4℃；
6、使用提取的RNA的5µL作为模板执行rRTPCR分析；
7、使用BIORAD CFX96™实时热循环仪进行rRTPCR检测，阈值周期（Ct）值低于40的为阳性标准。
Proteinase K改善了痰液样本的均质效果和阳性率，并增加了从中提取的核酸浓度。
甲型流感病毒（IAV）核酸提取的协议如下：
1、将样本分装到三个EP管中（每管500μL）；
2、加入500μL浓度为0.4mg/mL的蛋白酶K缓冲液，振荡混匀20秒；
3、在55℃孵育25分钟，每5分钟振荡混匀5秒；
4、使用自动化核酸提取系统通过顺磁性珠法提取RNA，使用200μL样品进行提取；
5、评估纯RNA产物的A260/A280比值，标准范围为1.8至2.0。
MCE并未独立确认这些方法的准确性。仅供参考。
