AF488 NHS ester
AF488 NHS ester 是一种胺特异性荧光探针 (Em=525 nm)。AF488 NHS ester 在水和生物样品中,与巯基和胺反应,并在衍生化后改变它们的化学结构和荧光性质。
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AF488 NHS ester的生物活性
体外研究
AF488 NHS ester 的 IgG 荧光标记与抗 IgG 固相肽库筛选
(1) 将冻干的 IgG 以 5 g/L 的浓度溶解在 50 mM 磷酸钠、20 mM 氯化钠、PH 8.3 的溶液中。
(2) 1 mg AF488 NHS ester 溶于 100 ?L extra dry DMF 中,加入 1 mL (1) 中溶液,室温旋转孵育 1 h。
(3) 用 Amicon Ultra 0.5-mL 离心式过滤装置,配有 3-kDa MWCO 过滤器收集样品。
(4) 六聚体或四聚体去保护文库在 50 mM 磷酸钠、150 mM 氯化钠、PH 7.4 (PBS) 溶液中以 5× 沉淀树脂体积洗涤三次以平衡。
(5) 用 50 mM 磷酸钠、150 mM 氯化钠、0.2% 吐温 (PH 7.4) 溶液稀释 IgG-AF488 至终浓度为 1.3 mg/mL。
(6) 将 (4) 和 (5) 在 2-8°C 下孵育过夜。
(7) 用 50 mM 磷酸钠、150 mM 氯化钠、0.1% 吐温 20、PH 7.4 (PBS-T) 洗涤树脂珠。
(8) 将树脂在 40 ?L PBS-T 的 96 孔板中每孔沉积 1 个珠,然后使用荧光显微镜以 10 倍放大率成像。在 480 nm 激发下,以 510 nm 发射强度为阈值进行 Alexa Fluor 488 荧光测量和荧光筛选。
AF488 NHS ester 储存液
用 DMF 配制 20 mM 的 AF488 NHS ester。
注:AF488 NHS ester 储存液建议分装后于 -20°C 避光保存。
MCE尚未独立证实这些方法的准确性。仅供参考。