MCE活性氧 ROS燃料 检测

　　活性氧 （Reactive Oxygen Species，ROS） 是生物有氧代谢过程中的副产物，是一类含氧并且性质活泼的物质的总称。ROS 的主要来源之一是线粒体内膜的呼吸链底物端。在有氧呼吸中，线粒体中的电子传递链复合物将电子传递给 O2，有一部分 O2 被还原，主要包括：超氧化物 （O2-）；过氧化氢 （H2O2）；单线态氧 （1O2）；羟基自由基 （HO.）；氢过氧自由基 （ROO.）；氧化物过氧亚硝基阴离子 （ONOO-） 等。

 

　　图 1. ROS 对细胞的影响

 

　　经典 HKSOX-1 系列

 

　　HKSOX-1 系列是对 O2- 具有极好选择性和敏感性的绿色荧光探针，可用于检测活细胞及体内的内源性超氧化物。HKSOX-1 （HY-130015） 为 HKSOX-1r （HY-130017） 升级版，可更好滞留在胞内，反映胞内信号。HKSOX-1m （HY-D1156） 则可特异性靶向线粒体，用于监测线粒体内O2-。

 

　　图 2. 受精后斑马鱼胚胎中内源性 O₂ - 的共聚焦成像

 

　　经典HKOCl 系列

 

　　HKOCl 系列是以铑为基础、特异性检测 HOCl 的荧光探针。HKOCl-3 （HY-130025） 为绿色荧光探针，而 HKOCl-4 （HY-130027） 为黄色荧光探针，具有更长的吸收波长和更好的 pH 稳定性。HKOCl-4m （HY-D1158） 特异靶向线粒体，可用于监测线粒体内 HOCl。

 

　　图 3. HKOCl-3 在多种细胞类型中检测内源性 HOCl

 

　　染色实验简要流程（以 HKOCl-3 为例）

 

　　HKOCl-3染色液配制

 

　　* 储存液的配制

 

　　用 DMSO 配制 10 mM 的 HKOCl-3。如用 203 μL DMSO 溶解 1 mg HKOCl-3。

 

　　注：HKOCl-3 储存液建议分装后于 -20 ℃ 或 -80 ℃ 避光保存）

 

　　* 工作液的配制

 

　　用预热好的无血清细胞培养基或 PBS 稀释储存液，配制成 1-10 μM 的 HKOCl-3 工作液

 

　　（注：请根据实际情况调整 HKOCl-3 工作液浓度，且现用现配）

 

　　* 细胞染色

 

　　悬浮细胞：离心收集细胞，加入 PBS 洗涤两次，每次 5 分钟。

 

　　贴壁细胞：弃去培养基，加入胰蛋白酶消化细胞。离心弃去上清后，加入 PBS 洗涤两次，每次 5 分钟。加入 1 mL HKOCl-3 工作液，室温孵育 30 分钟。400 g，4 ℃ 离心 3-4 分钟，弃去上清。加入 PBS 洗涤细胞两次，每次 5 分钟。用 1 mL 无血清培养基或 PBS 重悬细胞后，使用荧光显微镜进行观察