NPS-2143是CaSR抑制剂

    NPS-2143是选择性的钙敏感受体 (CaSR) 拮抗剂，IC50 为 43 nM。

 

    MCE 的所有产品仅用作科学研究，我们不为任何个人用途提供产品和服务

 

    NPS-2143生物活性

 

    体外

 

    NPS-2143阻断细胞质Ca 2+ 浓度的增加，IC 50为43 nM，通过激活表达人Ca 2+ 受体的HEK 293细胞中的Ca 2+受体而引发。NPS-2143刺激牛甲状旁腺细胞分泌甲状旁腺激素（PTH），EC 50为41 nM。此外，NPS 214还阻断拟钙剂NPS R-467对牛甲状旁腺细胞分泌PTH的抑制作用，以及细胞外Ca 2+对异丙肾上腺素刺激的环AMP形成增加的抑制作用。在瞬时表达hCaSR的HEK-293细胞中，NPS-2143通过有效抑制GSH和γ-Glu-Val-Gly的活性而显着抑制浓厚的味道。最近的一项研究表明，NPS-2143处理可抑制转染CaSR的HEK 293细胞中azuki水解产物诱导的缩胆囊素（CCK）分泌的低分子量部分。

 

    体内

 

    NPS-2143导致大鼠血浆PTH水平快速增加4-5倍，血浆Ca2 +  水平也随之升高。在血压正常的大鼠中，NPS-2143给药（1 mg / kg，iv）显着增加甲状旁腺存在时的平均动脉血压（MAP）。

 

    实验参考方法

 

    激酶测定

 

    该克隆细胞系，称为HEK 293 4.0-7细胞，以高通量筛选形式用于检测Ca 2+  受体的激动剂和变构激活剂。细胞质[Ca 2+ ] i 浓度的变化提供了这些细胞中Ca 2+受体活性的定量和功能评估，并且使用该测定的结果与使用牛甲状旁腺细胞的同源表达系统获得的结果平行。使用定制的荧光分光光度计或荧光成像板读取仪器获得在装载fluo-3或fura-2的HEK 293 4.0-7细胞中的荧光的在线连续测量。将NPS-2143与细胞一起温育1分钟，然后增加细胞外Ca 2+的浓度 从1.0 mM到1.75 mM。NPS-2143在100μg/ mL（20μM-80μM）的浓度下单独测试，并且导致对照响应超过40％抑制的那些被认为是生物学活性的。为了确定具有生物活性的NPS-2143 的效力（IC 50），获得浓度 - 响应曲线，然后，作为选择性的初始评估，NPS-2143对由其他G蛋白诱发的[Ca 2+ ] i的作用。 - 以IC 50的几倍浓度检测偶联受体。野生型HEK 293细胞（和HEK 293 4.0-7细胞）表达凝血酶，缓激肽和ATP的受体，它们与细胞内Ca 2+的动员相结合。可以研究这些反应以快速评估化合物对G蛋白偶联受体的任何非选择性作用。另外的选择性测定包括HEK 293细胞，其被工程化以表达与Ca 2+受体序列和拓扑结构最相同的受体。这些包括各种代谢型谷氨酸和γ-氨基丁酸B型受体（GABABR）的天然或嵌合受体。使用代谢型谷氨酸受体和Ca 2+  受体的部分序列产生嵌合受体，工程化以偶联磷脂酶C的活化和细胞内Ca 2+的释放。 在HEK 293细胞中。然后对缺乏泛活性的NPS-2143进行结构修饰，并且在迭代过程中使用这些HEK 293 4.0-7细胞测定法监测它们的效力和选择性。

 

    MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。

 

    Animal Administration

 

    大鼠：在研究当天，用NPS-2143（0.1μmol/ kg·min）或载体，20％2-羟丙基-β水溶液静脉输注大鼠（0.1 mL / kg·min）120分钟环糊精。在输注开始之前和之后的不同时间收集血液样品（0.5mL），用于测量血浆PTH和Ca 2+水平。为了防止在实验过程中过多的血容量损失，对于每个血液样品，将红细胞沉淀重悬于等体积的正常大鼠血浆中并重新注射。 使用634型离子钙分析仪在收集后立即测量血浆Ca 2+水平。使用Immutopics大鼠PTH（1-34）免疫放射测定试剂盒测量PTH水平。

 

    MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。