Fasiglifam是一种有效的GPR40激动剂

　　Fasiglifam(TAK-875)是一种有效的，可口服的，具有选择性的GPR40激动剂，EC50值为72 nM。

 

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　　生物活性

 

　　体外研究

 

　　法西格列汉（TAK-875）（0.01-10μM）在CHO-hGPR40细胞中产生浓度依赖性的细胞内IP（肌醇磷脂，即肌醇磷酸）生成增加，其EC50为0.072μM。法西格列汉（TAK-875）（0.1-10μM）剂量依赖性地增加了CHO细胞中的细胞内IP生成。法西格列汉（TAK-875）（3-30μM）浓度依赖性地增加[Ca2+]i（胞内钙离子浓度）。在存在10 mM葡萄糖的情况下，TAK-875（0.001-10μM）剂量依赖性地刺激INS-1 833/15细胞中的胰岛素分泌。

 

　　体内研究

 

　　法西格列汉（TAK-875）（10 mg/kg,口服）可增加ZDF大鼠的血浆胰岛素水平。法西格列汉（TAK-875）（30 mg/kg,口服）可以改善禁食高血糖而不影响禁食正常血糖。法西格列汉（TAK-875）以30 mg/kg剂量，相比改善糖耐量的剂量高3至10倍，在正常葡萄糖稳态的SD大鼠中不会改变禁食血糖水平。同样，法西格列汉（TAK-875）在正常禁食血糖水平的SD大鼠中不会显著改变胰岛素分泌。

 

　　MCE未独立确认这些方法的准确性。仅供参考。

 

　　实验参考方法

 

　　细胞实验

 

　　INS-1 832/13细胞以2×104个细胞/孔的密度悬浮在RPMI培养基中，并被种植在96孔板中。向孔中添加1%BSA和0.1%DMSO（对照组），棕榈酸（10、100和1000μM），油酸（10、100和1000μM）或Fasiglifam（TAK-875：1、10和100μM）。培养72小时后，废弃培养基，将细胞预培养2小时，使用含有1mM葡萄糖和0.2%BSA的KRBH缓冲液，在37°C下进行预孵育。废弃预孵育缓冲液后，加入含有1或20 mM葡萄糖和0.2%BSA的KRBH缓冲液，进一步孵育2小时。如上所述，测量上清液中的胰岛素浓度。为了测量细胞内的胰岛素含量，将INS-1 832/13细胞暴露于含有1%BSA和0.1%DMSO的培养基（对照组），棕榈酸（1000μM），油酸（1000μM）或Fasiglifam（TAK-875）（100μM）。孵育后，用磷酸盐缓冲液洗涤细胞一次，然后加入酸醇溶液，并在冰上超声处理。通过在-30°C下孵育过夜，随后以4°C、12,000 rpm×5分钟的离心分离上清液，提取细胞内的胰岛素。

 

　　动物给药

 

　　在18周龄时，N-STZ-1.5大鼠空腹禁食，并口服给予0.5%甲基纤维素或Fasiglifam（TAK-8751，3和10 mg/kg）。60分钟后，所有动物接受口服葡萄糖负荷试验（1 g/kg）。在给药前、葡萄糖负荷前（时间0）、负荷后10、30、60和120分钟，从尾静脉收集血样。使用AutoAnalyzer 7080和放射免疫分析法测量血浆葡萄糖和胰岛素水平。为了观察Fasiglifam（TAK-875）对空腹正常血糖和高血糖的影响，SD大鼠（8周龄）或ZDF和ZL大鼠（12周龄）空腹禁食，并口服给予0.5%甲基纤维素、Fasiglifam（TAK-875）（10或30 mg/kg）、那格列奈（50 mg/kg）或格列本脲（10 mg/kg）。在给药前（时间0）和给药后0.5、1、2和3小时（SD大鼠）以及给药后0.5、1、2、4和6小时（ZDF和ZL大鼠），按上述方法测量血浆葡萄糖和胰岛素水平。

 

　　MCE未独立确认这些方法的准确性，仅供参考。