泊马度胺的作用Pomalidomide

　　泊马度胺Pomalidomide 是第三代免疫调节剂，以分子胶的方式作用。泊马度胺Pomalidomide 与 E3 连接酶 cereblon 相互作用，诱导必需的 Ikaros 转录因子的降解。

 

　　MCE 的所有产品仅用作科学研究或药证申报，我们不为任何个人用途提供产品和服务

 

　　生物活性

 

　　体外研究

 

　　泊马度胺Pomalidomide 还抑制全血 TNF-α，IC50 为 25 nM[1]。与载体处理的对照相比，将淋巴瘤细胞暴露于 泊马度胺Pomalidomide (CC-4047) 会导致细胞增殖减少 40%。泊马度胺Pomalidomide 抑制 Raji 细胞 40% 的 DNA 合成 (P=0.036)[2]。在 CD4+ 和 CD8+ 细胞中，泊马度胺Pomalidomide (CC-4047) 是最有效的 IL-2 升高剂，其次是 CC-6032 和 CC-5013。泊马度胺Pomalidomide 在升高 IL-2、IL-5 和 IL-10 方面明显强于 CC-5013，在升高 IFN-γ 方面略强于 CC-5013[3]。

 

　　体内研究

 

　　在 mAb 处理前连续两天给予 泊马度胺Pomalidomide (CC-4047) 可增强利妥昔单抗的抗肿瘤活性，并使荷淋巴瘤小鼠的中位生存期增加一倍。在统计学上，观察到用 Rituximab 处理的动物与 泊马度胺Pomalidomide + Rituximab 处理的动物之间存在显著差异。接受 泊马度胺Pomalidomide 和利妥昔单抗处理的动物的中位生存时间 (中位生存期，74 天；95% CI，70-78) 长于接受利妥昔单抗单一疗法处理的动物 (中位生存期，38 天；95% CI，26-50；log-秩检验，P=0.002)。如流式细胞术分析所示，在荷淋巴瘤 SCID 小鼠中，连续两天施用 CC-5013 或 泊马度胺Pomalidomide 会导致循环 NK 细胞数量显著增加[2]。对大鼠口服 泊马度胺Pomalidomide (POM) 50 mg/kg 后，血液中未结合的浓度在 4.6±2.4 小时时达到 1100±82 ng/mL 的 Cmax 值，同时 AUC(0-10) 值为 6800 ng hr/mL。然而，大脑中未结合的 POM 在 4.1h 时的 Cmax 值为 430 ng/mL，AUC(0-10) 值为 2700 ng hr/mL，未结合的 AUCbrain 与 AUCblood 的比率为 0.39。这些值与出色的血脑屏障穿透力一致。本研究中获得的结果与同时进行的研究中观察到的结果一致，该研究观察了小鼠口服 POM 后的全脑内容[4]。

 

　　实验参考方法

 

　　细胞实验

 

　　[2]

 

　　将淋巴瘤细胞系接种于96孔板中（每孔1×10⁵个细胞），分别暴露于梯度浓度的CC-5013、泊马度胺（Pomalidomide，2.5、5、10、20 和 40 μg/mL）或溶剂对照组，单独使用或与利妥昔单抗（Rituximab）或曲妥珠单抗（Trastuzumab，同型对照）联合使用，抗体终浓度为10 μg/mL。用含10% RPMI的培养基将每孔体积调整至200 μL。细胞在37°C、5% CO₂条件下孵育24和48小时。在孵育24或48小时后，每孔加入1 μCi的[³H]-胸腺嘧啶脱氧核苷，并继续培养18小时。随后使用细胞收获系统（Harvest system）将细胞收集至96孔玻璃滤膜上，通过自动液体闪烁计数器测定[³H]-胸腺嘧啶脱氧核苷的摄入量。每项实验重复三次，结果以24和48小时的每分钟计数（cpm）平均值±标准差（SD）表示[2]。

 

　　MCE未独立验证上述方法的准确性，仅供参考。

 

　　动物给药　[2][4]

 

　　小鼠实验 [2]

 

　　选用6至8周龄的SCID小鼠进行实验。在第0天，所有小鼠通过尾静脉注射接种1×10⁶个Raji细胞。肿瘤接种72小时后，将小鼠分为七个组。第一组（A组）为空白对照组，不接受任何治疗。B组和C组小鼠分别接受腹腔注射CC-5013（0.5 mg/kg）或泊马度胺（0.5 mg/kg），给药时间点为+3、+4、+8、+9、+13、+14、+18和+19天。D组和E组小鼠分别接受利妥昔单抗或曲妥珠单抗（同型对照）单药治疗，通过尾静脉注射给药，剂量为10 mg/kg，给药时间为+5、+10、+15和+20天。F组和G组小鼠接受联合治疗：F组为利妥昔单抗联合CC-5013，G组为利妥昔单抗联合泊马度胺。免疫调节药物（IMiDs）在每次利妥昔单抗给药前连续两天腹腔注射。治疗结束后，小鼠继续观察90天。研究终点为生存期，定义为出现肢体瘫痪的时间。达到终点或观察满3个月仍存活的小鼠均通过颈椎脱臼法处死。对所有主要器官（肝、肺、脑）进行病理学检查，以检测是否存在残留病灶。该实验共独立重复三次。

 

　　大鼠实验 [4]

 

　　共使用3只雄性CD-IGS大鼠。泊马度胺以单次灌胃方式经胃插管给药，剂量为50 mg/kg（5 mL/kg），制剂为0.5%羧甲基纤维素钠/0.25% Tween 80的混悬液。给药后10小时内，在4°C冷却的自动馏分收集器中以每25分钟一个间隔收集微透析液样本。为计算药时曲线下面积（AUC），将每个样本的校正浓度乘以其采集时间间隔（25分钟），再除以每小时60分钟，所得各时间点贡献值之和即为指定时间段内的总AUC。绘制药代曲线时，各样本浓度值对应于其采集时间段的中点时间。收集的微透析液在规定时间点取出，并在12小时内采用LC-MS/MS方法检测泊马度胺浓度。

 

　　MCE未独立验证上述方法的准确性，仅供参考。

 

　　参考文献

 

　　[1]. Zhu YX, et al. Molecular mechanism of action of the immune-modulatory drugs, thalidomide, lenalidomide and pomalidomide in multiple myeloma. Leuk Lymphoma. 2013 Apr;54(4):683-7.

 

　　[2]. Hernandez-Ilizaliturri FJ1, et al. Immunomodulatory drug CC-5013 or CC-4047 and rituximab enhance antitumor activity in a severe combined immunodeficient mouse lymphoma model. Clin Cancer Res. 2005 Aug 15;11(16):5984-92.

 

　　[3]. Schafer PH, et al. Enhancement of cytokine production and AP-1 transcriptional activity in T cells by thalidomide-related immunomodulatory drugs. J Pharmacol Exp Ther. 2003 Jun;305(3):1222-32.

 

　　[4]. Li Z, et al. Pomalidomide shows significant therapeutic activity against CNS lymphoma with a major impact on the tumor microenvironment in murine models. PLoS One. 2013 Aug 5;8(8):e71754.  [Content Brief]

 

　　[5]. Lu J, et al. Hijacking the E3 Ubiquitin Ligase Cereblon to Efficiently Target BRD4. Chem Biol. 2015 Jun 18;22(6):755-63.

 

　　[6]. Liu D, et al. Tumour necrosis factor-α inhibits hepatic lipid deposition through GSK-3β/β-catenin signaling in juvenile turbot (Scophthalmus maximus L.). Gen Comp Endocrinol. 2016 Mar 1;228:1-8