BMN673是PARP1/2抑制剂

    Talazoparib (BMN-673) 是高效的 PARP1/2 抑制剂，Ki 值分别为 1.2 nM 和 0.87 nM。

 

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    BMN673的生物活性

 

    体外研究

 

    塔拉唑巴（BMN 673）表现出优异的效力，抑制PARP1和PARP2酶活性，K i分别为1.2和0.87 nM 。Talazoparib（BMN 673）具有选择性抗肿瘤细胞毒性，并且引发DNA修复生物标志物的浓度远低于早期的PARP1 / 2抑制剂（如Olaparib，Rucaparib和Veliparib）

 

    体外研究

 

    Talazoparib（BMN 673; 1mg / kg，口服）可口服，在口服给予单剂或与其组合后，在BRCA1突变体MX-1乳腺癌异种移植模型中显示出有利的药代动力学（PK）性质和显着的抗肿瘤功效。化疗药物如替莫唑胺和顺铂。塔拉唑巴（BMN 673）易于口服生物利用，当在羧甲基纤维素中给药时，大鼠的绝对口服生物利用度超过40％。Talazoparib的口服给药引起显着的抗肿瘤活性，由于BRCA突变或PTEN缺乏导致DNA修复缺陷的异种移植肿瘤对小鼠耐受良好的口服Talazoparib治疗非常敏感。

 

    BMN673的实验参考

 

    激酶测定

 

    使用PARP1测定试剂盒评估测试化合物抑制PARP1酶活性的能力。使用GraphPad Prism5软件计算IC 50值。为PARP抑制剂? 我测定，酶测定在96孔的FlashPlate与0.5U的PARP1酶，0.25×活化DNA，0.2微居里[进行3 H] NAD和5μM冷NAD在50μL的在反应的最终体积含有10％甘油（v / v），25mM HEPES，12.5mM MgCl 2的缓冲液，50mM KCl，1mM二硫苏糖醇（DTT）和0.01％NP-40（v / v），pH 7.6。通过在有或没有抑制剂的情况下将NAD加入PARP反应混合物中并在室温下温育1分钟来引发反应。然后向每个孔中加入50微升冰冷的20％三氯乙酸（TCA）以淬灭反应。将板密封并在室温下再摇动120分钟，然后离心。绑定到FlashPlate的放射性信号使用TopCount确定。使用来自各种底物浓度（1-100μMNAD）的Michaelis-Menten方程确定PARP1 K m。根据下式，由酶抑制曲线计算化合物K i：K i = IC 50 / [1+（底物）/ K m]。? 米为PARP2酶和化合物的Ki用相同测定规程测定除了PARP2的那30纳克，0.25×活化DNA，0.2微居里[ 3 H] NAD和20μM冷NAD在反应中使用在室温30分钟温度。

 

    MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。

 

    细胞分析

 

    在单药试验中，将Capan-1细胞（BRCA2缺陷型），MX-1（BRCA1缺陷型）细胞或其他培养细胞以密度接种，允许在96孔板中线性生长10-12天（通常500-3000个细胞/孔）。将细胞在其推荐的含有不同浓度的PARP抑制剂（Veliparib，Rucaparib，Niraparib，Olaparib和Talazoparib）的生长培养基中处理10-12天（每5天用新鲜化合物更换培养基）。使用GraphPad Prism5计算IC 50值。

 

    MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。

 

    Animal Administration

 

    小鼠

 

    MX-1肿瘤异种移植物。当肿瘤达到约150mm 3的平均体积时，以单剂量给予奥拉帕尼（100mg / kg），他拉唑巴（1mg / kg）或媒介物。在药物给药后2小时，8小时和24小时收获肿瘤并在液氮中快速冷冻。肿瘤组织，然后在PBS中均质化，在冰上，并用裂解缓冲液（25mM的Tris，pH 8.0中，150mM NaCl的，5mM的EDTA，2mM的EGTA，25mM的氟化钠，2mM的钠萃取3 VO 4，1mM的PEFABLOC，1含有1％SDS的％Triton X-100和蛋白酶抑制剂混合物。使用PARP体内PD测定II试剂盒通过ELISA测定肿瘤裂解物中PAR的水平。

 

    MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。