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U0126抑制剂

  U0126是一种有效,非ATP竞争性的 MEK1 和 MEK2 抑制剂,IC50 分别为70 nM和60 nM。

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  U0126的生物活性

  体外

  用U0126处理有效地降低了A549细胞中所有测试菌株的子代病毒滴度。 虽然nM浓度的U0126有效降低H1N1v和H5N1(MB1),但需要μM浓度的U0126来降低H5N1(GSB)和H7N7的病毒滴度。 U0126对H1N1v的EC50值在A549细胞中为1.2±0.4μM,在MDCKII细胞中为74.7±1.0μM[2]。胎牛血清(FCS)刺激的肝癌细胞(FAO)在S期显示出显着比例(32.62) U0126强烈降低S期细胞比例(9.92%),G0-G1期细胞比例增加,G2 / M期细胞比例增加[3]。

  体内

  每天用U0126(腹膜内注射,10.5mg / kg)处理小鼠。 在对照实验中,肿瘤大小在整个动力学中是恒定的或略微增加的。 相反,在所有U0126实验中,植入和早期肿瘤生长显着减少。 此外,注射后9天及之后,用U0126治疗的肿瘤体积减少60-70%[3]。 对大鼠进行120分钟的短暂大脑中动脉闭塞(tMCAO),然后在再灌注0和24小时用U0126(腹膜内注射,30mg / kg)处理。 用U0126治疗后,S6c的血管收缩明显减少[4]。

  U0126的溶剂和溶解度

  体外:

  DMSO:≥49mg / mL(114.87 mM)

  H2O:<0.1 mg / mL(不溶)

  *“≥”表示可溶,但饱和度未知

  体内:

  1。逐个加入每种溶剂:10%DMSO 90%玉米油

  溶解度:3.33 mg / mL(7.81 mM); 暂停解决方案; 需要超声波和加热

  2。逐个添加每种溶剂:2%DMS??O 40%PEG300 5%Tween-80 53%盐水

  溶解度:≥1mg / mL(2.34 mM); 明确解决方案

  3。逐个添加每种溶剂:10%DMSO 40%PEG300 5%Tween-80 45%盐水

  溶解度:≥3.33mg / mL(7.81 mM); 明确解决方案

      实验参考方法

  U0126的细胞分析[2]

  将A549和MDCK II细胞接种于96孔培养板中,密度为每孔8×104个细胞,含有10%热灭活的胎牛血清(FCS),100U / mL青霉素,100的最小必需培养基(MEM) mg / mL链霉素。 将细胞在37℃,5%CO 2下孵育过夜。 此后,用PBS洗涤细胞两次。 将含有不同浓度的U0126(0.001-1000μM)的MEM加入细胞中。 加入U0126后,将细胞在37℃和5%CO 2下再培养48小时。 然后,通过在4℃下用100μL4%多聚甲醛(PFA)温育30分钟来固定细胞。 在室温下加入100μL结晶紫30分钟染色活细胞。 染色后,洗涤板并干燥。 为了从活细胞中提取结晶紫,向每个孔中加入100μL的100%甲醇。 在室温下孵育30分钟后,用酶联免疫吸附测定(ELISA)读数器在OD = 490nm处测量消光。 计算用抗病毒化合物处理后细胞存活率的百分比[2]。

  MCE尚未独立确认这些方法的准确性。 它们仅供参考。

  Animal Administration

  小鼠[3]

  使用无胸腺雌性裸鼠(SWISS,nu / nu)。 在注射之前,FI细胞用稳定的荧光染料分子,10μg/ mL的DiA在37℃标记5小时。 洗涤去除游离的DiA后,用胰蛋白酶处理细胞用于接种(U0126实验)或转染(RNAi实验)。 将胆管上皮细胞在指定的时间皮下注射到裸鼠的胫骨中。 在化学实验中,接种后3小时,通过腹膜内注射每天用U0126(10.5mg / kg)处理小鼠。 每天使用卡尺测量每个肿瘤的长度和宽度。 以下公式用于计算肿瘤体积=宽度2×长度/ 2。 在实验结束时杀死小鼠。 肿瘤立即在液氮中冷冻。

  大鼠[4]

  使用12周龄雌性Wistar大鼠(250至265g),基于先前对雄性大鼠的药物评估,在tMCAO后再灌注0和24小时时注射U0126(30mg / kg腹膜内)。 研究II中的动物施用U0126或载体,并在tMCAO后14天被杀死。 实验组分配随机化并对手术实验者不知情。

  MCE尚未独立确认这些方法的准确性。 它们仅供参考。

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