Maraviroc是选择性的CCR5拮抗剂
2019-04-12 
MCE小分子
Maraviroc是选择性的CCR5拮抗剂，具有抑制 HIV 的活性
体外
Maraviroc是一种选择性CCR5拮抗剂，具有强效的抗人类免疫缺陷病毒1型（HIV-1）活性。 Maraviroc抑制趋化因子诱导的细胞内钙重新分布的下游事件，针对MIP-1β，MIP-1α和RANTES获得的IC50为7至30nM。 当使用分离的多个（合并的）供体PBMC（IC90,3.1 nM）在5天抗病毒测定中测量时，Maraviroc在低纳摩尔浓度下对HIV-1 Ba-L（实验室适应的R5菌株）具有活性（IC90）， 单供体PBMC（IC90,1.8 nM）或PM-1细胞（IC90,1.1 nM）。
体内
静脉注射后，大鼠和狗的清除值均为中等至高。 给药（分别为74和21mL / min / kg）。 Maraviroc在两个物种中的分布均适中（4.3至6.5升/ kg）。 maraviroc的半衰期值在大鼠中为0.9小时，在狗中为2.3小时。 口服给药（2mg / kg）后，Cmax（256ng / mL）发生1.5小时。 给药后，生物利用度为40％。 对于大鼠，口服给药后在门静脉中获得的浓度的研究表明，约30％的给药剂量是从肠道吸收的。 在DSS / TNBS结肠炎和转移模型中，Maraviroc通过选择性地减少携带CCR5的白细胞的募集来减轻肠道炎症的发展。
实验参考方法
激酶测定
基本上使用稳定表达受体或其膜制剂的完整HEK-293细胞测量125 I标记的MIP-1α，MIP-1β和RANTES与CCR5的结合。 简而言之，将细胞重悬于结合缓冲液（含有1mM CaCl 2,5mM MgCl 2和0.5％牛血清白蛋白[BSA]的50mM HEPES并调节至pH 7.4）至2×10 6个细胞/ mL的密度。 对于膜制剂，将磷酸盐缓冲盐水（PBS）洗涤的细胞重悬于裂解缓冲液（20mM HEPES，1mM CaCl 2,1片剂，每50mL，pH 7.4; Boehringer）中，然后在Polytron手持式均质器中均质化。 ，超速离心（40,000×g，30分钟），并在结合缓冲液中重新悬浮至蛋白质浓度为0.25mg / mL（在96孔板的每个孔中使用12.5μg膜蛋白）。 制备125 I-放射性标记的MIP-1α，MIP-1β和RANTES，并在测定中在结合缓冲液中稀释至终浓度为400pM。 向每个孔中加入适当的maraviroc稀释液至终体积为100μL，将测定板温育1小时，并通过预封闭和洗涤的Unifilter板过滤内容物，在过夜干燥后计数。
MCE尚未独立确认这些方法的准确性。 它们仅供参考。
细胞分析
将HEK-293细胞等分试样（100μL，1×10 6个细胞/ mL）接种到聚-D-赖氨酸包被的板中，并在37℃下孵育过夜。 将可溶性重组人CD4（sCD4）（在培养基中稀释至4.5nM）和HIV-1 gp120的1：1混合物在室温下孵育15分钟，然后在稀释的存在下加入PBS洗涤的细胞中。 maraviroc能够确定IC50。 将测定板在37℃下孵育1小时并洗涤。 将Eu3 +标记的抗gp120抗体（在测定缓冲液中1/500稀释）加入每个孔（50μL）中并孵育1小时。 在加入增强溶液（200μL/孔）和测量Eu3 +荧光（Victor2多标记计数器;“铕”方案）之前，用洗涤缓冲液洗涤板三次。 非特异性结合作为在没有与sCD4预孵育的情况下与细胞一起孵育的gp120的荧光测量。
MCE尚未独立确认这些方法的准确性。 它们仅供参考。
动物实验
老鼠和狗
对雄性Sprague-Dawley大鼠进行单次静脉内和口服给药后，使用maraviroc进行临床前药代动力学研究（静脉内给予1 mg / kg体重[iv]，口服给予10 mg / kg [po]; n = 2） 和雄性比格犬（0.5mg / kg静脉注射和2mg / kg po; n = 4）。 血浆样品在给药后长达24小时，并且使用特定的高效液相色谱 - 串联质谱分析测定未改变的马拉维罗的浓度。
小鼠
从6-10周龄的CCR5 - / - 小鼠或野生型对照小鼠（每组n = 8）收集脾细胞，并通过细胞分选分离幼稚CD4 + CD45RB高T细胞。 然后将总共3×105个CD45RB高细胞静脉内注射到Rag1 - / - 小鼠中，随后称重并每20天评估粪便评分以评估IBD发展。 为了研究Maraviroc是否从转移性结肠炎引起的肠道炎症中拯救，Rag1 - / - 小鼠注射CD4 + CD45RB - / - T细胞，34天后随机分入对照组（无需进一步治疗，n = 6）或治疗 用Maraviroc，50 mg / kg / d Maraviroc口服（n = 4）3周，每周5 d。
MCE尚未独立确认这些方法的准确性。 它们仅供参考。
体外
Maraviroc是一种选择性CCR5拮抗剂，具有强效的抗人类免疫缺陷病毒1型（HIV-1）活性。 Maraviroc抑制趋化因子诱导的细胞内钙重新分布的下游事件，针对MIP-1β，MIP-1α和RANTES获得的IC50为7至30nM。 当使用分离的多个（合并的）供体PBMC（IC90,3.1 nM）在5天抗病毒测定中测量时，Maraviroc在低纳摩尔浓度下对HIV-1 Ba-L（实验室适应的R5菌株）具有活性（IC90）， 单供体PBMC（IC90,1.8 nM）或PM-1细胞（IC90,1.1 nM）。
体内
静脉注射后，大鼠和狗的清除值均为中等至高。 给药（分别为74和21mL / min / kg）。 Maraviroc在两个物种中的分布均适中（4.3至6.5升/ kg）。 maraviroc的半衰期值在大鼠中为0.9小时，在狗中为2.3小时。 口服给药（2mg / kg）后，Cmax（256ng / mL）发生1.5小时。 给药后，生物利用度为40％。 对于大鼠，口服给药后在门静脉中获得的浓度的研究表明，约30％的给药剂量是从肠道吸收的。 在DSS / TNBS结肠炎和转移模型中，Maraviroc通过选择性地减少携带CCR5的白细胞的募集来减轻肠道炎症的发展。
实验参考方法
激酶测定
基本上使用稳定表达受体或其膜制剂的完整HEK-293细胞测量125 I标记的MIP-1α，MIP-1β和RANTES与CCR5的结合。 简而言之，将细胞重悬于结合缓冲液（含有1mM CaCl 2,5mM MgCl 2和0.5％牛血清白蛋白[BSA]的50mM HEPES并调节至pH 7.4）至2×10 6个细胞/ mL的密度。 对于膜制剂，将磷酸盐缓冲盐水（PBS）洗涤的细胞重悬于裂解缓冲液（20mM HEPES，1mM CaCl 2,1片剂，每50mL，pH 7.4; Boehringer）中，然后在Polytron手持式均质器中均质化。 ，超速离心（40,000×g，30分钟），并在结合缓冲液中重新悬浮至蛋白质浓度为0.25mg / mL（在96孔板的每个孔中使用12.5μg膜蛋白）。 制备125 I-放射性标记的MIP-1α，MIP-1β和RANTES，并在测定中在结合缓冲液中稀释至终浓度为400pM。 向每个孔中加入适当的maraviroc稀释液至终体积为100μL，将测定板温育1小时，并通过预封闭和洗涤的Unifilter板过滤内容物，在过夜干燥后计数。
MCE尚未独立确认这些方法的准确性。 它们仅供参考。
细胞分析
将HEK-293细胞等分试样（100μL，1×10 6个细胞/ mL）接种到聚-D-赖氨酸包被的板中，并在37℃下孵育过夜。 将可溶性重组人CD4（sCD4）（在培养基中稀释至4.5nM）和HIV-1 gp120的1：1混合物在室温下孵育15分钟，然后在稀释的存在下加入PBS洗涤的细胞中。 maraviroc能够确定IC50。 将测定板在37℃下孵育1小时并洗涤。 将Eu3 +标记的抗gp120抗体（在测定缓冲液中1/500稀释）加入每个孔（50μL）中并孵育1小时。 在加入增强溶液（200μL/孔）和测量Eu3 +荧光（Victor2多标记计数器;“铕”方案）之前，用洗涤缓冲液洗涤板三次。 非特异性结合作为在没有与sCD4预孵育的情况下与细胞一起孵育的gp120的荧光测量。
MCE尚未独立确认这些方法的准确性。 它们仅供参考。
动物实验
老鼠和狗
对雄性Sprague-Dawley大鼠进行单次静脉内和口服给药后，使用maraviroc进行临床前药代动力学研究（静脉内给予1 mg / kg体重[iv]，口服给予10 mg / kg [po]; n = 2） 和雄性比格犬（0.5mg / kg静脉注射和2mg / kg po; n = 4）。 血浆样品在给药后长达24小时，并且使用特定的高效液相色谱 - 串联质谱分析测定未改变的马拉维罗的浓度。
小鼠
从6-10周龄的CCR5 - / - 小鼠或野生型对照小鼠（每组n = 8）收集脾细胞，并通过细胞分选分离幼稚CD4 + CD45RB高T细胞。 然后将总共3×105个CD45RB高细胞静脉内注射到Rag1 - / - 小鼠中，随后称重并每20天评估粪便评分以评估IBD发展。 为了研究Maraviroc是否从转移性结肠炎引起的肠道炎症中拯救，Rag1 - / - 小鼠注射CD4 + CD45RB - / - T细胞，34天后随机分入对照组（无需进一步治疗，n = 6）或治疗 用Maraviroc，50 mg / kg / d Maraviroc口服（n = 4）3周，每周5 d。
MCE尚未独立确认这些方法的准确性。 它们仅供参考。
