六合心法有三式
2021-10-12 
MCE小分子
那是一个夜黑风高的夜晚，刚开学的 M 酱正要去参加开学 party，突然接到了导师的电话，说明天正式安排给 M 酱三个课题，让他提前有个心理准备。M 酱瞬间没了出去玩的兴致，脱下了新买的衣服，卸掉了精致的妆，开始思考人生，三个完全没有关系的实验啊，同时开展会不会全搞砸啊……
翻来覆去睡不着的 M 酱忍不住向师兄师姐求救，热心的师兄立马送来了历代传承的“实验宝典之六合心法”
M 酱一个激灵从床上坐了起来，翻开“六合心法”，津津有味读了起来！
“六合心法” 第一式
■ PolyFast 转染试剂 （PolyFast Transfection Reagent）
细胞转染主要将 DNA/RNA 导入真核细胞；转染方法五花八门，常见的转染方法可分为化学法、物理法和生物法。但是没有一种方法是可以通用的，所以不少研究者在实际实验过程中难免踩雷…
来！先了解一下常见的几项转染技术
图 1. 常见转染技术
不同转染技术都有各自明显的优缺点，是不是不知道该怎么选择啦？告诉你一个绝招吧图片PolyFast Transfection Reagent！其原理是当带正电荷的聚合物和带负电荷的 DNA/RNA 结合成复合物后，通过胞吞作用进入细胞，并在胞质中将核酸释放出来，完成转染。
图 2. 转染步骤
操作简单，适用性广，在体内和体外都有很高的转染效率，且对细胞几乎没有毒性，这可是转染实验中的一大法宝
“六合心法” 第二式
■ Anti-Flag 亲和凝胶 （Anti-Flag Affinity Gel）
体外重组蛋白表达技术是较常用的蛋白分析手段，目前已渗透到生物学的各个领域，其主要流程包括载体构建→表达鉴定→蛋白纯化三个步骤。载体构建过程中，合适的标签蛋白可直接影响后续蛋白的表达与纯化，本心法主要针对 Flag 标签蛋白！
知己知彼，才能百战百胜。要想成功的将 Flag 标签蛋白纯化下来，肯定需要了解Flag 标签蛋白是什么啦
Flag 标签蛋白为编码 8 个氨基酸的亲水性多肽 （DYKDDDDK），可通过基因工程技术加到目的蛋白末端。形成的融合蛋白可以直接进行 Flag 亲和层析，也可以被抗 Flag 的抗体识别，也可使用肠激酶将 Flag 标签切除后得到特异性目的蛋白，因此 Flag 标签蛋白已广泛用于蛋白表达、纯化及功能研究等相关领域
本心法中的 Anti-Flag Affinity Gel 是由高质量的鼠源 lgG2b 单克隆抗体与琼脂糖 Sepharose 4B 共价偶联而得，具有较高的 Flag 标签蛋白结合容量，可用于细菌和哺乳动物细胞裂解物以及体外表达系统中 Flag 标签蛋白的免疫沉淀、蛋白纯化实验。
图 3. Anti-Flag Affinity Gel 的组成成分
图 4. Anti-Flag Affinity Gel 的使用步骤 （仅供参考）
M 酱：“欧耶，又学到一招！看来今晚我就能把实验要用到的三招学会了
“六合心法” 第三式
■ 双荧光素酶报告基因检测试剂盒 （Renilla-Firefly Luciferase Dual Assay Kit）
荧光素酶是自然界中能够产生生物荧光的酶的总称，可催化荧光素氧化成氧化荧光素，并在此过程中发出生物荧光，可用荧光测定仪测定。这一反应体系广泛用于启动子转录活性调控和 miRNA 靶基因验证等方面的研究。
目前最常见的荧光素酶是萤火虫荧光素酶 （Firefly luciferase） 和海肾荧光素酶 （Renilla luciferase），前者用于荧光素酶报告基因的检测，后者则作为内参，消除细胞生长状态、数量、转染效率等差异的影响，使结果更准确
本心法中的 Renilla-Firefly Luciferase Dual Assay Kit 含有高纯度的 D-荧光素、腔肠素以及比例优化的反应缓冲液，可实现哺乳动物细胞双萤光素酶报告基因检测，操作简单、检测快捷、灵敏度高。
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高效低毒、操作简便、重复性好的转染试剂盒。可高效地对 DNA、RNA进行转染。对多种常见细胞具有高水平转染效率，对原代细胞和难转染细胞也具有较好的效果。
Anti-Flag Affinity Gel
是一种纯化的小鼠 IgG2b 单克隆抗体，共价连接琼脂糖 Sepharose 4B。可用于大肠杆菌、酵母、昆虫和哺乳动物表达系统中表达的Flag标记蛋白的高效纯化或免疫沉淀 （IP）。
Renilla-Firefly Luciferase Dual Assay Kit
含有高纯度的 D-荧光素、腔肠素以及比例优化的反应缓冲液，实现哺乳动物细胞双萤光素酶报告基因检测。
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