PNU-159682是一种有效的 ADC 细胞毒素

　　PNU-159682是一种高效的蒽环类新霉素代谢产物（DNA拓扑异构酶II抑制剂），具有突出的细胞毒性，是一种有效的ADC细胞毒素。

 

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　　生物活性

 

　　体外

 

　　PNU-159682用IC抑制一组人类肿瘤细胞系70 值在0.07-0.58 nM的范围内，分别比MMDX和阿霉素的效力高2360-790倍和6420-2100倍。PNU-159682（100μM）弱抑制拓扑异构酶II的键结活性。PNU-159682（10μM）-DNA加合物包含一个或两个与双链DNA结合的药物分子。PNU-159682用IC对表达CAIX的SKRC-52细胞显示细胞毒性作用50 25 nM

 

　　体内

 

　　PNU-159682（15μg/ kg，iv）在携带弥散鼠L1210白血病的小鼠和MX-1人乳腺癌异种移植物中显示4μg/ kg的抗肿瘤活性。PNU-159682（25 nmol / kg）在患有SKRC-52异种移植肿瘤的小鼠中表现出有效的抗肿瘤作用

 

　　实验参考方法

 

　　激酶测定

 

　　拓扑异构酶II活性的抑制作用是通过利用该酶分解动质体DNA（kDNA）的能力来测试的；该测试对拓扑异构酶II的两种同工型（α和β）都具有特异性，因为它依赖于链状DNA转化为其解链形式的转化，这需要双链切割和拓扑异构酶II独特地进行的连接。此测试中使用的DNA是Fasciculata的线粒体的线粒体kDNA，这是一个由DNA环连接而成的网络，其中大多数是2.5 kb的单体。kDNA网络相对于单体而言较大，并且不会在孔中残留的凝胶中迁移，而微环可轻松在琼脂糖凝胶中分辨。凝胶和运行缓冲液均含有嵌入剂溴化乙锭，它允许使用紫外线光源监视单体外观，以及不同DNA形式（线性，带缺口的环状DNA和松弛的DNA单体）的分辨率，从而有助于将线性DNA与带缺口的环状DNA清晰地区分开。在该测试中，将200 ng的kDNA在37°C下与10、1、1或0.1μM的阿霉素，或与100、10或1μM的PNU-159682在0.025 U人拓扑异构酶存在下孵育1小时。拓扑异构酶II反应缓冲液中的IIα（Tris-HCl pH 7.9 40 mM，KCl 80 mM，DTT 5 mM，BSA 15μg/ mL，ATP 1 mM和MgCl210毫米）。孵育结束时，向每个样品中加入3μL凝胶上样缓冲液（二甲苯腈0.25％，蓝色溴酚0.25％，Ficoll 400 18％和EDTA 6 mM），然后通过琼脂糖（1％）凝胶进行分析电泳。在存在0.5μg/ mL溴化乙锭的情况下，在TBE缓冲液（Tris 89 mM，硼酸89 mM，EDTA 2 mM，pH 8.0）中进行运行。样品以1 V / cm运行过夜。

 

　　MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。

 

　　细胞测定

 

　　将SKRC-52细胞以每孔5000个细胞的密度接种在添加10％FCS（100μL）的RPMI的96孔板中，并使其生长24小时。用含有不同浓度测试物质的培养基替换培养基（1：3稀释步骤），并将板在标准培养条件下孵育。去除培养基72小时后，加入150μL培养基中的MTS细胞活性染料（20μL），将板在培养条件下孵育2小时，并在Spectra Max Paradigm多模式读板仪上测量490 nm的吸光度。一式三份进行实验，将平均细胞活力计算为测得的背景校正吸光度除以未处理对照孔的吸光度。我知道了50 使用Prism 6软件进行数据分析，通过将数据拟合到四参数对数方程来确定值。

 

　　MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。

 

　　动物实验方法

 

　　使用四至六周龄的雌性CD-1无胸腺裸鼠评估PNU-159682对MX-1人乳腺异种移植物的活性。在第0天，将动物（n ＝ 14）皮下移植有右侧翼中的MX-1肿瘤片段。8天后，将它们随机分配到药物治疗组或对照组（每组n ＝ 7只小鼠），并开始治疗。根据q7dx3（每7天一次，共三剂）时间表，静脉注射PNU-159682（4μg/ kg）；对照动物接受盐水注射。肿瘤体积是用卡尺测量得出的。其中D和d分别是最长和最短直径。出于伦理原因，在第21天将对照组动物处死，此时该组的平均肿瘤体积约为2500 mm3; 监测接受药物治疗的动物直至第50天，然后处死它们。

 

　　MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。