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2-NBDG

  2-NBDG 是一种荧光标记的脱氧葡萄糖类似物,主要用于直接监测活细胞和组织的葡萄糖摄取。它还可用作局部对比剂,用于检测肿瘤。2-NBDG 可用于实时共焦、高分辨率或广场荧光显微镜以及流式细胞术。探针可以被 488 nm 的激光激发,产生环境敏感荧光。光稳定性低于罗丹明荧光探针。
 
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  生物活性
 
  体外研究
 
  1. 2-NBDG 工作液准备
 
  1.1 制备储存液
 
  用 2.92 mL DDH2O 稀释 1 mg 2-NBDG 配制 1 mM 储备液。
 
  1.2 工作液的配制
 
  用预热好的无血清细胞培养基或 PBS 稀释储存液,配制成 10-200 μM 的 2-NBDG 工作液。
 
  注:请根据实际情况调整 2-NBDG 工作液浓度,且现用现配。
 
  2.细胞染色
 
  2.1 悬浮细胞:离心收集细胞,加入 PBS 洗涤两次,每次 5 分钟。
 
  贴壁细胞:弃去培养基,加入胰蛋白酶消化细胞。离心弃去上清后,加入 PBS 洗涤两次,每次 5 分钟。
 
  2.2 加入 1 mL 2-NBDG 工作液,室温孵育 5-60 分钟。
 
  2.3 400 g,4℃ 离心 3-4 分钟,弃去上清。
 
  2.4 加入 PBS 洗涤细胞两次,每次 5 分钟。
 
  2.5 用 1 mL 无血清培养基或 PBS 重悬细胞后,使用流式细胞仪进行观察;
 
  如果用荧光显微镜观察,可不消化直接染色;
 
  如果进行活力测试,使用 ELISA 酶标仪记录 540/570 nm 的光密度 (O.D.)。细胞活力以对照比计算,并与药物对数浓度绘制曲线,计算 IC50。
 
  MCE 未对这些方法的准确性进行独立验证,仅供参考。

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