FITC 异硫氰酸荧光素酯是一种绿色荧光素衍生物
2025-06-27 
MCE
FITC，英文全称 Fluorescein Isothiocyanate，中文名称异硫氰酸荧光素，是生物学中应用最为广泛的一种绿色荧光素衍生物。
FITC 具有高吸收率和优良的荧光量子产率等特点。FITC 的异硫氰酸基团可与蛋白质上的氨基、巯基、咪唑、酪氨酰、羰基等基团相结合，从而实现包括抗体，凝集素在内的蛋白标记。
FITC 除了用作蛋白质标记物，还可用作蛋白质荧光示踪剂，通过标记抗体而快速鉴定病原体，或是用于蛋白质和多肽（HPLC）的微量测序。
FITC 的最大激发波长为 494 nm。一旦激发，在最大发射波长 520 nm 处呈黄-绿色荧光。此外，FITC 也是一种能诱发接触超敏反应 (CHS) 的半抗原，并诱导特应性皮炎模型。
FITC 具有高吸收率和优良的荧光量子产率等特点。FITC 的异硫氰酸基团可与蛋白质上的氨基、巯基、咪唑、酪氨酰、羰基等基团相结合，从而实现包括抗体，凝集素在内的蛋白标记。
FITC 除了用作蛋白质标记物，还可用作蛋白质荧光示踪剂，通过标记抗体而快速鉴定病原体，或是用于蛋白质和多肽（HPLC）的微量测序。
FITC 的最大激发波长为 494 nm。一旦激发，在最大发射波长 520 nm 处呈黄-绿色荧光。此外，FITC 也是一种能诱发接触超敏反应 (CHS) 的半抗原，并诱导特应性皮炎模型。
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别名：异硫氰酸荧光素酯; Fluorescein 5-isothiocyanate；荧光素-5-异氰酸酯
体外研究：
原液制备
1. 蛋白准备
为了获得最佳标记效果，请将蛋白 (抗体) 浓度配制为 1 mg/mL。
1) 蛋白溶液PH值应为 8.5±0.5，若 pH 低于 8.0，则用 1 M 碳酸氢钠进行调整。
2) 若蛋白浓度低于 1 mg/mL，标记效率会大大降低，为了获得最佳标记效率，建议最终蛋白质浓度范围为 1-10 mg/mL。
3) 蛋白必须在不含伯胺 (如 Tris 或甘氨酸) 和铵离子的缓冲液中，否则会影响标记效率。
2. 染料准备
将无水二甲基亚砜加入 FITC 小瓶中，制成 10 mM 储备溶液，震荡摇匀。
注：FITC 要现配现用，避光。
3. 染料用量计算
标记反应所需的 FITC 用量取决于要标记蛋白的用量，FITC 与蛋白的最佳质量比为 1：50 左右。
例：假如所需标记蛋白为 1 mL，2 mg/mL 的 IgG (MW=150,000)，用 1 mL DMSO 溶解一管 1 mg FITC，则所需 FITC 体积为 40 μL。
计算公式：
Molar F/P=(MW/389)*(A495/195)/{[A280-(0.35*A495)]/E0.1%}=(A495*C)/[A280-(0.35*A495)]
C=(MW*E0.1%280)/(389*195)
注：
C：一种蛋白质常数； MW：蛋白质分子量； 389：FITC 的分子量； 195：FITC 偶联物在 pH=13, 490 nm 处的吸光值 E0.1%； （0.35×A495）：基于 FITC A280 的校正因子； E0.1%：蛋白（1.0 mg/mL）在 280 nm 处的吸光值。
使用说明
1. 标记反应
1) 取算好体积的新鲜配制的 50 μL FITC 缓慢加入到 1 mL 蛋白样品溶液中，轻轻摇匀混合，然后短暂离心将样品收集在反应管底部。切忌剧烈混匀，防止蛋白样品变性失活。
2) 将该反应小管置于避光处，在室温条件下轻轻摇晃孵育 8 h，每隔 30 分钟，将反应小管轻轻颠倒几次，以充分混合两种反应物，提高标记效率。
3) 加入 5 M 的 NH4Cl 至终浓度 50 mM，4℃ 终止反应 2 h。
2. 蛋白纯化脱盐
以下方案以使用 Sephadex G-25 柱纯化染料蛋白偶联物为例。
1) 按照生产说明书制备 Sephadex G-25 柱。
2) 将反应混合物装入Sephadex G-25 色谱柱顶部。
3) 当样品运行到顶部树脂表面下方时，立即加入 PBS (pH 7.2-7.4)。
4) 向所需样品中加入更多的PBS (pH 7.2-7.4)，完成柱纯化。结合物含有所需要的染料-蛋白质缀合物的组分。
注意事项
1. FITC 对光及湿度敏感。即用即配 FITC 溶液并丢弃未使用的部分。
2. 低浓度的叠氮化钠 (≤3 mM 或 0.02％) 或硫柳汞 (≤0.02 mM 或 0.01％) 不会显著干扰蛋白标记；但是 20-50％ 的甘油会降低标记效率。
3. 避免使用含伯胺 (例如 Tris，甘氨酸) 或铵离子的缓冲液，它们与待标记蛋白竞争反应。
4. 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品。
5. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
参考文献
[1]. Gao SG, et al. Phosphorylation of osteopontin has proapoptotic and proinflammatory effects on human knee osteoarthritis chondrocytes. Exp Ther Med. 2016 Nov;12(5):3488-3494. Epub 2016 Oct 5.
[2]. Zhu X, et al. Ratiometric, visual, dual-signal fluorescent sensing and imaging of pH/copper ions in real samples based on carbon dots-fluorescein isothiocyanate composites. Talanta. 2017 Jan 1;162:65-71
[3]. Shigeno T, et al. Phthalate ester‐induced thymic stromal lymphopoietin mediates allergic dermatitis in mice[J]. Immunology, 2009, 128(1pt2): e849-e857.
