FTY720盐酸芬戈莫德别称Fingolimod hydrochloride

　　盐酸芬戈莫德Fingolimod hydrochloride (FTY720) 是鞘氨醇的类似物，是一种有效的 1-磷酸鞘氨醇 (S1P) 受体调节剂。盐酸芬戈莫德Fingolimod hydrochloride 被鞘氨醇激酶磷酸化，特别是被 SK2 磷酸化，然后可与 S1PR1、3、4 和 5 结合。Fingolimod hydrochloride 诱导 S1P1 的内在化，因此抑制 S1P 的活性。盐酸芬戈莫德Fingolimod hydrochloride 还是一种 pak1 激活剂。

 

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　　生物活性

 

　　体外研究

 

　　盐酸芬戈莫德Fingolimod hydrochloride (FTY720) 是一种 S1P 拮抗剂，在 K562 和 NK 细胞中的 IC50 为 0.033 nM[1]。

 

　　单核细胞来源的未成熟树突状细胞 (iDC) 在与 NK 细胞孵育之前，先用不同浓度的 S1P 预处理不同的时间段。将自体或同种异体 iDC 与 0.2 -20 μM S1P 孵育 4 小时可显著保护这些细胞免受 NK 细胞裂解。S1P 的 IC50 值计算为自体 iDC 为 160 nM，同种异体 iDC 为 34 nM。接下来，S1P 的抑制作用被各种浓度的盐酸 Fingolimod hydrochloride (FTY720) 或 SEW2871 所证实，其 IC50 效应分别为 173 或 15 nM[1]。免疫调节剂 Fingolimod hydrochloride (FTY720) 是 S1P 的结构类似物，在其磷酸化亚型中作为 S1P1 和 S1P3-5 的非选择性激动剂和选择性功能拮抗剂起作用在 S1P1 上。

 

　　盐酸芬戈莫德FTY720 通过抑制 S1P 裂解酶活性提高血清 S1P 水平[2]。

 

　　统计同侧 CA3 区 Iba1+ 细胞数，对应图显示红藻氨酸 CA3 区 Iba1+ 细胞数显著减少 (KA) +FTY720 组优于 KA 组 CA3[3]。

 

　　体内研究

 

　　给予免疫调节剂 Fingolimod hydrochloride盐酸芬戈莫德 (0.1 mg/kg iv) 可增加血清 S1P，改善受损的收缩收缩力并激活心脏中的 PI3K 通路。施用盐酸 Fingolimod hydrochloride (FTY720) 会导致假手术动物和接受 LPS/PepG 攻击的动物的血清 S1P 水平显著升高 (P<0.0001)[2]。FTY720 减弱小胶质细胞增生，通过减少 LPS 介导的 p38 MAPK 信号通路激活来调节小胶质细胞炎症表型。因此，FTY720 具有直接的神经保护和抗炎特性，可促进整体神经保护。特别是，盐酸芬戈莫德FTY720 将小胶质细胞表型从有害表型转变为保护表型的潜力代表了一种减轻急性和慢性 CNS 损伤的处理机制[3]。

 

　　实验参考方法

 

　　细胞测定[1]

 

　　1、实验材料：未成熟树突状细胞（DCs）。

 

　　2、处理方案：

 

　　　　将细胞保持完整或与以下物质一起孵育4小时：

 

　　　　　　2 μM S1P

 

　　　　　　10 nM Fingolimod 盐酸盐

 

　　　　　　10 nM SEW2871

 

　　　　　　S1P与上述药物的组合

 

　　　　对照组使用 1 μg/mL LPS。

 

　　3、后处理：

 

　　　　清洗细胞并将其重悬于96孔板中（V型底，2×10^5个细胞/孔）。

 

　　　　再次清洗，重悬于含有0.1%叠氮钠的PBS缓冲液中。

 

　　4、标记：

 

　　　　用以下抗体进行标记（每种均为1 μg/mL）：

 

　　　　　　FITC标记的小鼠抗人CD80

 

　　　　　　FITC标记的小鼠抗人CD83

 

　　　　　　FITC标记的小鼠抗人CD86

 

　　　　　　FITC标记的小鼠抗人HLA-class I

 

　　　　　　FITC标记的小鼠抗人HLA-DR

 

　　　　　　FITC标记的小鼠抗人HLA-E

 

　　　　　　FITC标记的小鼠IgG作为对照。

 

　　5、分析：

 

　　　　清洗两次后，在流式细胞仪中检测细胞。

 

　　　　根据同种型对照FITC标记的小鼠IgG设置标记。

 

　　备注：MCE 并未独立确认这些方法的准确性。仅供参考。

 

　　动物给药

 

　　小鼠研究[2]

 

　　实验对象：2个月大的雄性 C57BL/6J 小鼠或鞘氨醇激酶-2缺乏（SPHK-2-/-）小鼠，体重25-30克，自由摄取标准饮食和水。

 

　　处理方案：

 

　　　　C57BL/6J 野生型或 SPHK-2-/- 小鼠接受以下腹腔注射：

 

　　　　　　LPS (9 mg/kg) / PepG (1 mg/kg) 或其载体（0.9% 生理盐水）。

 

　　　　假手术小鼠不接受 LPS/PepG，但其他处理相同。

 

　　后续处理：

 

　　　　在 LPS/PepG 挑战 1 小时后，小鼠接受 Fingolimod 盐酸盐（0.1 mg/kg 静脉注射）或其载体（10% DMSO）。

 

　　　　为了阐明 Fingolimod 盐酸盐观察到的不同 S1P 受体作用，小鼠在 LPS/PepG 后 45 分钟和 Fingolimod 盐酸盐之前 15 分钟接受选择性 PI3K 抑制剂 LY294002（0.3 mg/kg 静脉注射）或选择性 S1P2 受体拮抗剂 JTE 013（1 mg/kg 静脉注射），或在 LPS/PepG 后 1 小时接受选择性 S1P1 受体激动剂 SEW2871（1 mg/kg 静脉注射）或载体（10% DMSO）。

 

　　大鼠研究[3]

 

　　实验对象：斯普拉格-道利大鼠（200 到 250 g）。

 

　　处理方案：

 

　　　　Fingolimod 盐酸盐通过脑室内给药（1 μg/2 μL），同时与 Kainic Acid (KA) 联合使用，并在施用前24小时通过腹腔注射（1 mg/kg），每日给药，持续至牺牲（3天后）。

 

　　评估指标：

 

　　　　评估神经评分、CA3 海马区域的神经元损失以及病灶部位小胶质细胞的活化。

 

　　备注：MCE 并未独立确认这些方法的准确性。仅供参考。

 

　　参考文献

 

　　[1]. Rolin J, et al. FTY720 and SEW2871 reverse the inhibitory effect of S1P on natural killer cell mediated lysis of K562 tumor cells and dendritic cells but not on cytokine release. Cancer Immunol Immunother. 2010, 59(4), 575-586.

 

　　[2]. Coldewey SM, et al. Elevation of serum sphingosine-1-phosphate attenuates impaired cardiac function in experimental sepsis. Sci Rep. 2016 Jun 9;6:27594.

 

　　[3]. Cipriani R, et al. FTY720 attenuates excitotoxicity and neuroinflammation. J Neuroinflammation. 2015 May 8;12:86.

 

　　[4]. Arielle M Bryan, et al. Sphingosine-1-phosphate receptors and innate immunity. Cell Microbiol. 2018 May;20(5):e12836.