CY7是一种CY染料
2024-09-05 
MCE
CY7 是一种 CY 染料。CY 为花菁 (Cyanine) 的缩写，是由奇数个甲基单位连接的两个氮原子组成的化合物。菁类化合物具有波长长、吸收和发射可调、消光系数高、水溶性好、合成相对简单等特点。CY 系类染料常被用于蛋白，抗体以及小分子化合物的标记，对于蛋白抗体的标记，可以通过简单的混合反应来完成结合，以下我们介绍了蛋白抗体标记的标记方法，具有一定的参考意义。
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生物活性
Protocol
体外研究
1、蛋白制备
1) 为获得最佳标记效果，请制备蛋白 (抗体) 浓度为 2 mg/mL。
2) 蛋白溶液的 pH 值为 8.5±0.5。如果 pH 值低于 8.0，应使用 1 M 碳酸氢钠进行调节。
3) 如果蛋白浓度低于2 mg/mL，标记效率会大大降低。为获得最佳标记效率，建议终蛋白浓度范围为2-10 mg/mL。
4) 蛋白必须在不含伯胺 (如Tris或甘氨酸) 的缓冲液中，并且铵离子，否则会影响标记效率。
2.染料制备 (以 CY3-NHS 酯为例)
将无水 DMSO 加入CY3-NHS 酯小瓶中，制成 10 mM 储备液。通过移液器或涡旋混合均匀。
使用前需先使用缩合液 (500 μg/mL) (HY-D0178) 活化后方可进行后续标记实验。 相关产品推荐：JC-1线粒体膜电位检测和FITC蛋白标记试剂盒
3.染料用量的计算
反应所需的CY3-NHS酯的量取决于待标记蛋白的量，以及 CY3-NHS 的最佳摩尔比是 10。
Example：假设所需的 marker protein 为 500 μL 2 mg/mL IgG (MW=150,000)，用 100 μL DMSO 溶解 1 mg CY3-NHS ester，得到所需的 CY3-NHS ester 体积为5.05 μL，详细计算过程如下：
1) mmol (IgG) =mg/mL (IgG) ×mL (IgG)/MW (IgG) =2 mg/mL × 0.5 mL/150，000 mg/mmol= 6.7×10-6 mmol
2) mmol (CY3-NHS 酯) =mmol (IgG) × 10=6.7×10-6 mmol×10=6.7 × 10-5 mmol
3) uL (CY3-NHS 酯) =mmol (CY3-NHS 酯) ×MW (CY3-NHS 酯)/mg/μL (CY3-NHS 酯) =6.7 ×10-5 mmol ×753.88 mg/mmol/0.01 mg/μL=5.05 μL (CY3-NHS 酯)
4.运行偶联反应
1) 将适量新鲜制备的 10 mg/mL CY3-NHS 酯缓慢加入到 0.5 mL 蛋白质样品中
在溶液中，轻轻摇动混匀，然后短暂离心，将样品收集在反应管底部。请勿混匀，以免蛋白样品变性失活。
2) 将反应管置于避光处，在室温下间隔轻轻孵育 60 分钟。10-15 分钟，轻轻颠倒几次以充分混合 相关产品推荐：FITC-Dextran荧光染料
5. 纯化偶联物
以下方案是使用 SepHadex G-25 柱纯化染料-蛋白偶联物的示例。
1) 根据制造说明准备 SepHadex G-25 柱。
2) 将反应混合物 (来自“Run conjugation reaction”) 加载到 SepHadex G-25 柱的顶部。
3) 一旦样品在顶部树脂表面下方运行，立即添加 PBS (pH 7.2-7.4)。
4) 向所需样品添加更多 PBS (pH 7.2-7.4) 以完成柱纯化。合并含有所需染料-蛋白质偶联物的级分。
MCE尚未独立确认这些方法的准确性。仅供参考。
参考文献
[1]. Ptaszek M. Rational design of fluorophores for in vivo applications. Prog Mol Biol Transl Sci. 2013;113:59-108.
[2]. Lim B, et al. A Unique Recombinant Fluoroprobe Targeting Activated Platelets Allows In Vivo Detection of Arterial Thrombosis and Pulmonary Embolism Using a Novel Three-Dimensional Fluorescence Emission Computed Tomography (FLECT) Technology. Theranostics. 2017 Feb 26;7(5):1047-1061.
[3]. Shindy, H. A. (2017). Fundamentals in the chemistry of cyanine dyes: A review. Dyes and Pigments, 145, 505–513. doi:10.1016/j.dyepig.2017.06.029
