X-GAL 是一种无色的化合物

2024-06-18 　　　 MCE

　　X-GAL (BCIG) 是一种广泛使用的显色 β-半乳糖苷酶底物。在被 β-半乳糖苷酶裂解之前，X-GAL 是一种无色的化合物，裂解后 X-GAL 变成一种不溶性且可检测的蓝色化合物，这使得 X-GAL 可用于细菌克隆的蓝白筛选等技术中。X-GAL也可用于检测 β-半乳糖苷酶的活性。

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　　X-GAL的生物活性

　　体外研究

　　将细胞 (以 HUVEC 为例) 在培养皿中培养至 80% 的合度时，在培养基中加入 50 μmol/L H2O2，培养 12 h。

　　随后用胰蛋白酶/EDTA 收获细胞，用 PBS 洗涤 3 次，再用 4% 甲醛固定 10 min。

　　以同样方法制备未经 H2O2 处理的细胞作为对照。

　　37 ℃ 下 X-gal 染色。

　　切除肠组织，纵向切开。将肠道内容物用磷酸盐缓冲液冲洗干净后，将肠道组织内表面朝上置于载玻片上。

　　将含有 β-gal (大肠杆菌 DH5α 含 pUC18) 的单个蓝色菌落在 100 μL PBS 中稀释，然后在组织中加入 10 μL。

　　孵育 1 小时后，用 PBS 溶液洗涤组织。作为对照，用同样的方法制备不含蓝色菌落的组织。

　　所有组织用 4% 甲醛固定 10 分钟，并在 37 ℃ 下加入 X-gal 进一步染色。

　　MCE尚未独立确认这些方法的准确性。仅供参考。