Rhod-2 AM钙离子探针

　　Rhod-2 是一种高亲和可见光激发波长的 Ca2+ 荧光探针，Rhod-2 AM 是 Rhod-2 的乙酰甲酯衍生物，具有细胞膜通透性，简单培养即可轻松进入细胞。一旦进入细胞，被其乳糖酶剪切产生无膜渗透性的 Rhod-2，留在细胞内执行相应的生理功能。最大激发/发射波长: 549/578 nm。

 

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　　生物活性

 

　　体外研究

 

　　1. Rhod-2 AM工作液的配制

 

　　1.1 原液的制备

 

　　将 Rhod-2 AM 溶解在 DMSO 中，获得 5 mM 储备溶液。

 

　　1.2 Rhod-2 AM工作液的配制

 

　　用无血清细胞培养基或 PBS 稀释储备液，以获得 5-10 μM 的工作溶液。

 

　　注：请根据实际情况调整 Rhod-2 AM 工作液的浓度。

 

　　2. 细胞染色（6孔板） 2.1 悬浮细胞 a. 4℃、1000g 离心 3-5 分钟，弃上清。PBS 洗两次，每次 5 分钟。细胞密度为 1×106/mL。

 

　　b.加入1 mL 工作液，然后室温孵育 5-30 分钟。

 

　　c. 4℃、400g 离心 3-4 分钟，弃上清。

 

　　d. 用 PBS 洗涤两次，每次 5 分钟。

 

　　e. 用无血清细胞培养基或 PBS 重悬细胞。 通过荧光显微镜或流式细胞术观察。

 

　　2.2 贴壁细胞

 

　　a. 在无菌盖玻片上培养贴壁细胞。

 

　　b. 从培养基中取出盖玻片并吸出多余的培养基。

 

　　c. 加入100 μL 工作液，轻轻摇匀，使细胞完全覆盖，室温孵育 5-30 分钟。相关产品推荐：D-Luciferin

 

　　d. 用培养基洗涤两次，每次 5 分钟。荧光显微镜或流式细胞仪观察。

 

　　实验参考方法

 

　　细胞实验

 

　　对于流式细胞荧光仪分析，首先收集细胞并沉淀后，在冰冷的含有10 mM葡萄糖、10% 胎牛血清（FBS）和10 μM Rhod-2 AM (Rhod2-AM)的PBS中重悬。通过流式细胞荧光仪分析4×105个细胞的孵育物，确定线粒体钙离子水平。对于荧光显微镜检查，IMR5细胞在聚赖氨酸涂层（10 μg/mL）的载玻片上生长，并使用7.5 μM Rhod-2 AM在含有10% FBS的Dulbecco改良的鹰之介质（DMEM）中染色，随后进行脊髓灰质炎病毒（PV）感染前的培养2小时。将细胞固定在4°C的4%多聚甲醛中孵育15分钟。细胞用PBS洗涤，并使用Zeiss Apotome和Axiovision软件获取图像。

 

　　MCE尚未独立确认这些方法的准确性。此处仅供参考。