BETd-260蛋白降解剂

　　BETd-260 (ZBC 260) 是由Cereblon配体和BET配体相连的PROTAC，在白血病细胞 RS4;11 中，在 30 pM 的低浓度下，能够降低 BRD4 蛋白活性。BETd-260 能显著抑制肝细胞癌 HCC 细胞的活性并诱导细胞凋亡(apoptosis)。

 

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　　生物活性

 

　　体外研究

 

　　betd - 260 (ZBC260;化合物23)能够在30-100 pM时诱导RS4白血病细胞中BRD2、BRD3和BRD4蛋白的降解。BETd-260对RS4;11白血病细胞和MOLM-13细胞的生长表现出抑制作用，ic50分别为51 pM和2.2 nM，并在3-10 nM诱导RS4;11和MOLM-13细胞系凋亡。

 

　　BETd-260在HCC细胞中相互调节几种凋亡基因的表达，即抑制抗凋亡的Mcl-1、Bcl-2、c-Myc和XIAP的表达，而增加促凋亡的Bad的表达。

 

　　体内研究

 

　　BETd-260 (5 mg/kg，静脉注射，每隔一天一次，每周三次，连续3周)可使携带RS4;11种异种移植肿瘤的小鼠肿瘤快速消退，最大消退率>90%，小鼠无体重减轻或其他毒性迹象。BETd-260 (5 mg/kg，静脉注射)降解BRD2、BRD3和BRD4蛋白超过24小时，在RS4;11异种移植小鼠模型中具有PARP和caspase-3的强裂解作用，并强烈下调c-Myc蛋白。

 

　　实验参考方法

 

　　细胞试验

 

　　在细胞生长实验中，将细胞接种于96孔细胞培养板中，密度为10000 ~ 20000个细胞/孔，培养液为100 μL。在适当的培养基中连续稀释BETd-260，将含有BETd-260的稀释溶液100 μL加入到细胞板的适当孔中。加入BETd-260后，细胞在5% CO2的环境中，37°C孵育4天。细胞生长通过乳酸脱氢酶为基础的WST-8测定，使用多模式微孔板阅读器进行评估。将WST-8试剂加到板上，孵育至少1小时，在450 nm处读取。将读数归一化到dmso处理后的细胞，使用GraphPad Prism 6软件进行非线性回归分析计算IC50。

 

　　动物实验

 

　　小鼠

 

　　将5 × 106 RS4;11细胞(含50% Matrigel)皮下注射于重度联合免疫缺陷(SCID)小鼠背侧，每只小鼠1个肿瘤，形成异种移植肿瘤。当肿瘤达到约100 mm3时，将小鼠随机分为BETd-260治疗组和对照组。每天监测动物是否有任何毒性迹象，在治疗期间每周称重2-3次，在BETd-260治疗结束后至少每周称重一次。在治疗期间，每周用电子卡尺测量肿瘤大小2-3次，治疗结束后至少每周测量一次。肿瘤体积计算公式为V = LW2/2，其中L为肿瘤的长度，W为肿瘤的宽度。

 

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