Vari Fluor 680 SE标记染料
2023-08-15 
MCE
Vari Fluor 680 SE （VF 680 SE） 是 Vari Fluor SE 系列的标记染料 （Ex/Em=680 nm/700 nm）。Vari Fluor SE 系列染料是一类含有 NHS 酯基的荧光染料，用于标记抗体、蛋白质、肽、胺修饰的寡核苷酸和其他生物分子上的游离胺 （-NHX）。
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Vari Fluor 680 SE的生物活性
体外研究
原液制备
1.蛋白准备
为了获得最佳标记效果，请将蛋白 （抗体） 浓度配制为 2 mg/mL。
1） 蛋白溶液 pH 值应为 8.5±0.5，若 pH 低于 8.0，则用 1 M 碳酸氢钠进行调整。
2） 若蛋白浓度低于 2 mg/mL，标记效率会大大降低，为了获得最佳标记效率，建议最终蛋白质浓度范围为 2-10 mg/mL。
3） 蛋白必须在不含伯胺 （如 Tris 或甘氨酸） 和铵离子的缓冲液中，否则会影响标记效率。
2.染料准备
将无水 DMSO 稀释 VF 染料，制成 10 mg/mL 储备溶液。通过玻璃管或旋涡充分混合。
注：VF 储存液建议分装后于 -20 ℃ 或 -80 ℃ 避光保存。
3.染料工作液用量计算
标记反应所需的 VF 染料用量取决于要标记蛋白的用量，VF 染料与蛋白的最佳摩尔比为 10 左右。
例：假如所需标记蛋白为 500 μL 2 mg/mL 的 IgG （MW=150,000），用 100 μL DMSO 溶解一管 1 mg VF 染料，则所需 VF 体积为 3.95 μL，详细计算流程如下（以 VF 488 为例）：
1） mmol （IgG） = mg/mL （IgG）×mL （IgG） / MW （IgG） =2 mg/mL×0.5 mL / 150,000 mg/mmol= 6.7×10-6 mmol
2） mmol （VF 488） = mmol （IgG）×10 =6.7×10-6 mmol×10 = 6.7×10-5 mmol
3） μL （VF 488） = mmol （VF 488）×MW （VF 488） / mg/μL （VF 488） = 6.7×10-5 mmol× 834 mg/mmol / 0.01 mg/μL = 5.6 μL （VF 488）
Vari Fluor 680 SE的使用方法
1.标记反应
1） 取算好体积的新鲜配制的 10 mg/mL VF 染料缓慢加入到 0.5 mL 蛋白样品
溶液中，轻轻摇匀混合，然后短暂离心将样品收集在反应管底部。切忌剧烈混匀，防止蛋白样品变性失活。 2） 将该反应小管置于避光处，在室温条件下轻轻摇晃孵育 60 分钟，每隔 10-15 分钟，将反应小管轻轻颠倒几次，以充分混合两种反应物，提高标记效率。
2. 蛋白纯化脱盐
以下方案是使用 Sephadex G-25 柱纯化染料蛋白偶联物为例。
1）按照生产说明书制备 Sephadex G-25 柱。
2）将反应混合物装入 Sephadex G-25 色谱柱顶部。
3）当样品运行到顶部树脂表面下方时，立即加入 PBS （pH 7.2-7.4）。
4）向所需样品中加入更多的 PBS （pH 7.2-7.4），完成柱纯化。结合含有所需要的染料-蛋白质缀合物的组分。
保存条件
-20℃ 避光保存
注意事项
1.VF 染料对光及湿度敏感。即用即配 VF 溶液并丢弃未使用的部分。
2.低浓度的叠氮化钠 （≤3 mM 或 0.02％） 或硫柳汞 （≤0.02 mM 或 0.01％） 不会显著干扰蛋白标记；但是 20-50％ 的甘油会降低标记效率。
3.避免使用含伯胺 （例如 Tris，甘氨酸） 或铵离子的缓冲液，它们与待标记蛋白会发生竞争反应降低标记效率。
4.本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品。
5.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
MCE尚未独立证实这些方法的准确性。仅供参考
