Favipiravir抑制剂

    Favipiravir (T-705) 是一种病毒RNA聚合酶 (RNA polymerase) 抑制剂，可转变为其活性形式 Favipiravir-ribofuranosyl-5′-triphosphate (RTP)。Favipiravir-RTP 抑制流感病毒RNA依赖性的RNA聚合酶 (RdRP) 活性，IC50 为 341 nM。

 

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    生物活性

 

    体外

 

    Favipiravir（T 705）是一种抗病毒药物，可选择性抑制流感病毒的RNA依赖性RNA聚合酶。Favipiravir（T 705）是一种新型抗病毒化合物，可选择性和有效抑制流感病毒和许多其他RNA病毒的RNA依赖性RNA聚合酶（RdRP）。Favipiravir-RTP不会抑制IC 50 > 1 mM 的人类DNA聚合酶α，β或γ 。人RNA聚合酶II 的IC 50为905μM；因此，法维吡韦对流感病毒RdRP的选择性高出2,650倍，这与缺乏对宿主细胞DNA和RNA合成的抑制作用一致[1]。Favipiravir（T 705）充当前药，其细胞毒性预期是细胞系依赖性的。Favipiravir以剂量依赖性方式抑制MNV诱导的CPE（EC 50：250±11μM）和细胞培养中的MNV RNA合成（EC 50：124±42μM）。尽管抗病毒活性相当低，但Favipiravir（T 705）能够以100μg/ mL的浓度完全抑制诺如病毒复制，该浓度对宿主细胞几乎没有或没有不利影响（细胞活力> 80％）。相关推荐：Arbidol hydrochloride

 

    体内

 

    与安慰剂相比，Favipiravir（T 705）（30 mg / kg /天，口服）可提高生存率。无论每天剂量多寡，Favipiravir（T 705）还可以以33 mg / kg /天或更高的剂量为A / Duck / MN / 1525/81（H5N1）病毒提供有效的保护。每天给药4次，所有小鼠都能存活。

 

    实验参考方法

 

    细胞分析

 

    使用MNV / RAW 264.7细胞系中基于MTS的CPE还原测定法确定Favipiravir（T 705）的抗病毒活性。为此，播种RAW 264.7细胞（1×10 4细胞/孔）在96孔板中，并在存在或不存在Favipiravir（T 705）（3.13-200μg/ mL）稀释系列的情况下，以0.001的MOI感染MNV。孵育3天后，即直到在未感染的未处理细胞中观察到完全CPE为止，收集细胞培养上清液以通过定量RT-PCR（qRT-PCR）定量病毒RNA载量。对于MTS还原测定，将MTS /甲基硫酸吩嗪（PMS）储备溶液（pH值为6-6.5的PBS中的2 mg / mL MTS和46 g / mL PMS）稀释至1/20在MEM中。向每个孔中添加75μLMTS / PMS溶液，并在2小时后在498 nm处读取光密度（OD）。CPE减少百分比计算为[（OD 处理后）MNW -OD VC ] / [OD CC -OD VC ]×100，其中ODCC表示未感染的未处理细胞的OD，而OD VC和（OD 处理的）CC分别表示经化合物浓度处理的感染的未处理细胞和病毒感染的细胞的OD。EC 50定义为保护50％的细胞免于病毒诱导的CPE的化合物浓度。通过将未感染的细胞暴露于相同浓度的Favipiravir中3天，还可以通过MTS方法评估该分子对宿主细胞的不良影响。细胞存活百分比计算为（OD 处理 / OD CC）×100，其中OD CC是未感染的未处理细胞和OD 处理的 OD是用化合物处理的未感染细胞。CC 50定义为将活细胞数量减少50％的化合物浓度。选择性指数（SI）计算为CC 50 / EC 50。

 

    MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。

 

    Animal Administration

 

    小鼠

 

    Favipiravir（T 705）也已显示出保护小鼠免受多种流感病毒株致死性感染的作用。在感染了致死剂量的流感病毒A / Victoria / 3/75（H3N2），A / Osaka / 5/70（H3N2）或A / Duck / MN的小鼠中，每天口服2或4次，连续5天服用Favipiravir / 1525/81（H5N1）。

 

    MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。