D8-MMAE抑制剂

    D8-MMAE是氘代标记的有丝分裂抑制剂MMAE。

 

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    生物活性

 

    体外

 

    抗体 - 药物缀合物（ADC）包含具有有效小分子有效负载的靶向抗体。产生ADC以靶向间变性大细胞淋巴瘤细胞系L-82上的不同受体，但递送相同的细胞毒性有效负载（单甲基auristatin E，MMAE），并且释放的MMAE的细胞内浓度与体外ADC介导的细胞毒性相关，而与靶标无关。表达或药物：抗体比率。LC-MS用于测量具有相同治疗方案的平行L-82肿瘤组中MMAE的浓度。尽管治疗组在给药后3天肿瘤体积没有差异，但肿瘤内MMAE测量显示两种模式。首先，肿瘤内MMAE浓度与ADC剂量成比例增加，这相当于更强的抗肿瘤活性。第二

 

    在体内

 

    肿瘤内MMAE浓度始终与肿瘤异种移植模型中肿瘤生长抑制的程度相关。IHC分析显示非结合对照治疗的肿瘤由CD30 +和CD30 -细胞组成，可能是因为它们不杀死CD30 +或CD30 - Karpas 299细胞。在cAC10-vcMMAF处理的肿瘤中仅发现CD30 -细胞，说明cAC10-vcMMAF消除了大多数CD30 +细胞。有趣的是，从cAC10-vcMMAE治疗中复发的两种肿瘤也被发现是CD30 -在研究结束时，表明CD30的一小部分-在这两个剩余的肿瘤中，细胞可能已经从旁观者的死亡中逃脱

 

    实验参考方法

 

    激酶测定

 

    在ADC处理后24小时收集细胞沉淀。细胞计数，直径和圆形度在Vi-Cell计数器上测定。进行MMAE提取和定量方法。简言之，将肿瘤或细胞沉淀用含有内标的甲醇和乙腈（用于MMAE检测的d 8 -MMAE和用于MMAF检测的13 C-MMAF）均化。将匀浆以10,000rpm离心以沉淀蛋白质和蛋白质结合的有效负载。然后将上清液进行固相萃取，通过LC-MS检测MMAE和MMAF的信号。

 

    MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。