U-73122抑制剂
2019-05-24 
MCE小分子
U-73122是有效的 磷脂酶C (phospholipase C)，磷脂酶A2 (phospholipase A2) 和 5-脂氧合酶 (5-LO (5-lipoxygenase)) 抑制剂。
MCE 的所有产品仅用作科学研究，我们不为任何个人用途提供产品和服务
体外
U-73122有效抑制从PMN分离的膜中PLC的受体偶联活化。 U-73122抑制N-甲酰基 - 甲硫氨酰 - 亮氨酰 - 苯丙氨酸诱导的人多形核中性粒细胞（PMN）的聚集以及相关的IP3和二酰甘油的产生。 U-73122显着抑制由oxotremorine-M或鸟苷-5'-O-（3-硫代三磷酸）引起的肌醇磷酸盐释放，而不是由在洋地黄皂苷透化细胞中添加的Ca2 +诱导的。
体内
U73122显着减弱TNF-αmRNA表达，对假手术动物没有影响，但在不影响内毒素血症小鼠心率的情况下显着增加心脏功，收缩和放松率。 与对VTA的载体输注相比，U73122（400nM /μL）显着降低了雌激素和孕酮引发的仓鼠的总脊柱前凸持续时间。 U73122的VTA输注不会改变活动监测中仓鼠的运动行为，但与施用SKF38393的仓鼠相比，麝香醇对减少束断裂总数有显着影响
U-73122的溶剂溶解度
体内：
1、逐个添加每种溶剂：10％DMSO 90％（20％SBE-β-CD在盐水中）
溶解度：1.25 mg / mL（2.69 mM）; 暂停解决方案; 需要超声波
2、逐个添加每种溶剂：10％DMSO 40％PEG300 5％Tween-80 45％盐水
溶解度：1.25 mg / mL（2.69 mM）; 暂停解决方案; 需要超声波
3、逐个加入每种溶剂：10％DMSO 90％玉米油
溶解度：≥1.25mg / mL（2.69 mM）; 明确解决方案
U-73122的实验参考方法
激酶测定
根据方案，将PMN（4×107 / 4mL）与U-73122一起温育。 用冷的无钙PBS终止反应。 将细胞以750×g（4℃）离心，并重悬于1mL不含Triton X-100的提取缓冲液（50mM Tris，pH 7.5,50mM巯基乙醇，2mM EGTA，1mM苯甲基磺酰氟和4μg）中。 / mL亮肽素，大豆胰蛋白酶抑制剂和抑肽酶），然后在20％输出下超声连续10秒和5秒连续爆发。 将裂解物在TL-100超速离心机中以240×g（4℃）离心20分钟，将上清液指定为胞质溶胶级分。 将沉淀重悬浮于含1％Triton的提取缓冲液中，超声处理，在4℃下振荡30mm并离心（240×g，在4℃下20mm）。 上清液构成可提取的颗粒部分，并且用Triton在提取缓冲液中超声处理沉淀，并构成不可提取的颗粒部分。
MCE尚未独立确认这些方法的准确性。 它们仅供参考。
细胞分析
通过使用竞争性放射性结合组合来测量激动剂诱导的PMN中IP3的产生。PMN（2×106-107）在0.2mL磷酸盐缓冲盐水中，pH 7.4 [NaCl（138mM），Na 2 HPO 4（8.1mM），KH 2 PO 4（1.5mM），KCl（2.7mM），CaCl 2（1.0mM），将MgCl 2（1.0mM）和葡萄糖（0.1％，w / v）]在锥形聚丙烯管中于37℃在振荡水浴中温育。 在加入激动剂，FMLP（0.1μM）加细胞松弛素B（5μg/ mL）之前3分钟加入U-73122或U-73343（在1μLDMSO中）。分别以1μLDMSO和乙醇加入FMLP和细胞松弛素B. 每个实验中包括适当的载体对照。通过添加0.07mL冰冷的TCA（20％，w / v）淬灭PMN孵育混合物，并且如上所述用于血小板的竞争性放射性结合处理一部分（0.2mL）TCA提取物用于测量IP3。
MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。
Animal Administration
仓鼠在h 0时使用17β-雌二醇和在第45小时使用黄体酮进行激素引发。在第48小时，对仓鼠进行运动行为预测试，然后进行性行为测试，以及U73122（400 nM /μL）或盐水载体的双侧输注。输注后30分钟，仓鼠重新测试性行为（抑制剂后输注测试），并在测试后立即用SKF38393（100 ng /μL），蝇蕈醇（100 ng /μL）或盐水载体双侧输注。在激动剂或媒介物输注后30分钟，重新评估仓鼠的脊柱前凸和运动行为（激动剂输注后测试）。 所有仓鼠都被分配到一个预处理条件，U73122或载体，并且每周测试一次，持续3周，直到收到所有输注条件（SKF38393，蝇蕈醇或载体）。仓鼠接受SKF38393，muscimol或车辆输注的顺序在整个组中得到抵消。
MCE尚未独立确认这些方法的准确性。 它们仅供参考。
MCE 的所有产品仅用作科学研究，我们不为任何个人用途提供产品和服务
体外
U-73122有效抑制从PMN分离的膜中PLC的受体偶联活化。 U-73122抑制N-甲酰基 - 甲硫氨酰 - 亮氨酰 - 苯丙氨酸诱导的人多形核中性粒细胞（PMN）的聚集以及相关的IP3和二酰甘油的产生。 U-73122显着抑制由oxotremorine-M或鸟苷-5'-O-（3-硫代三磷酸）引起的肌醇磷酸盐释放，而不是由在洋地黄皂苷透化细胞中添加的Ca2 +诱导的。
体内
U73122显着减弱TNF-αmRNA表达，对假手术动物没有影响，但在不影响内毒素血症小鼠心率的情况下显着增加心脏功，收缩和放松率。 与对VTA的载体输注相比，U73122（400nM /μL）显着降低了雌激素和孕酮引发的仓鼠的总脊柱前凸持续时间。 U73122的VTA输注不会改变活动监测中仓鼠的运动行为，但与施用SKF38393的仓鼠相比，麝香醇对减少束断裂总数有显着影响
U-73122的溶剂溶解度
体内：
1、逐个添加每种溶剂：10％DMSO 90％（20％SBE-β-CD在盐水中）
溶解度：1.25 mg / mL（2.69 mM）; 暂停解决方案; 需要超声波
2、逐个添加每种溶剂：10％DMSO 40％PEG300 5％Tween-80 45％盐水
溶解度：1.25 mg / mL（2.69 mM）; 暂停解决方案; 需要超声波
3、逐个加入每种溶剂：10％DMSO 90％玉米油
溶解度：≥1.25mg / mL（2.69 mM）; 明确解决方案
U-73122的实验参考方法
激酶测定
根据方案，将PMN（4×107 / 4mL）与U-73122一起温育。 用冷的无钙PBS终止反应。 将细胞以750×g（4℃）离心，并重悬于1mL不含Triton X-100的提取缓冲液（50mM Tris，pH 7.5,50mM巯基乙醇，2mM EGTA，1mM苯甲基磺酰氟和4μg）中。 / mL亮肽素，大豆胰蛋白酶抑制剂和抑肽酶），然后在20％输出下超声连续10秒和5秒连续爆发。 将裂解物在TL-100超速离心机中以240×g（4℃）离心20分钟，将上清液指定为胞质溶胶级分。 将沉淀重悬浮于含1％Triton的提取缓冲液中，超声处理，在4℃下振荡30mm并离心（240×g，在4℃下20mm）。 上清液构成可提取的颗粒部分，并且用Triton在提取缓冲液中超声处理沉淀，并构成不可提取的颗粒部分。
MCE尚未独立确认这些方法的准确性。 它们仅供参考。
细胞分析
通过使用竞争性放射性结合组合来测量激动剂诱导的PMN中IP3的产生。PMN（2×106-107）在0.2mL磷酸盐缓冲盐水中，pH 7.4 [NaCl（138mM），Na 2 HPO 4（8.1mM），KH 2 PO 4（1.5mM），KCl（2.7mM），CaCl 2（1.0mM），将MgCl 2（1.0mM）和葡萄糖（0.1％，w / v）]在锥形聚丙烯管中于37℃在振荡水浴中温育。 在加入激动剂，FMLP（0.1μM）加细胞松弛素B（5μg/ mL）之前3分钟加入U-73122或U-73343（在1μLDMSO中）。分别以1μLDMSO和乙醇加入FMLP和细胞松弛素B. 每个实验中包括适当的载体对照。通过添加0.07mL冰冷的TCA（20％，w / v）淬灭PMN孵育混合物，并且如上所述用于血小板的竞争性放射性结合处理一部分（0.2mL）TCA提取物用于测量IP3。
MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。
Animal Administration
仓鼠在h 0时使用17β-雌二醇和在第45小时使用黄体酮进行激素引发。在第48小时，对仓鼠进行运动行为预测试，然后进行性行为测试，以及U73122（400 nM /μL）或盐水载体的双侧输注。输注后30分钟，仓鼠重新测试性行为（抑制剂后输注测试），并在测试后立即用SKF38393（100 ng /μL），蝇蕈醇（100 ng /μL）或盐水载体双侧输注。在激动剂或媒介物输注后30分钟，重新评估仓鼠的脊柱前凸和运动行为（激动剂输注后测试）。 所有仓鼠都被分配到一个预处理条件，U73122或载体，并且每周测试一次，持续3周，直到收到所有输注条件（SKF38393，蝇蕈醇或载体）。仓鼠接受SKF38393，muscimol或车辆输注的顺序在整个组中得到抵消。
MCE尚未独立确认这些方法的准确性。 它们仅供参考。
